月旭氨基酸分析方法包疑难详解

（图片来源：baotu）

哈喽，小伙伴大家好，为解决日常采用衍生法测氨基酸过程繁琐的问题，月旭科技推出了氨基酸分析方法包解决方案，具有高效、便捷的特点。客户在使用过程中也遇到一些疑问，

今天，小编将这些疑问汇总，并作详细解答。

（图片来源：baotu）

01、衍生步骤中说需把衍生化试剂稀释至原来浓度的1/5倍。这个稀释后的衍生化试剂溶液可以保存多久？

最好现配现用，放久了会变色变质不能使用。

02、检测方法是用正常进5针对照品溶液+4针样品溶液，还是建立标准曲线进行检测的？标准曲线如何配制？

此方法已通过线性关系、精密度、稳定性和重复性考察，客户可根据自身需求再次进行方法验证以满足检测需求。先用容量瓶配制标准曲线，再各移取160μL进行衍生操作。

03、标准品溶液浓度（μmol/mL与mg/mL）的单位转换表。

名称

分子量

浓度

（μmol/mL）

浓度

（mg/mL）

门冬氨酸

133.1

2.5

0.33275

谷氨酸

147.13

2.5

0.367825

丝氨酸

105.09

2.5

0.262725

甘氨酸

75.067

2.5

0.1876675

组氨酸

155.15

2.5

0.387875

精氨酸

174.2

2.5

0.4355

苏氨酸

119.12

2.5

0.2978

丙氨酸

89.093

2.5

0.2227325

脯氨酸

115.13

2.5

0.287825

胱氨酸

240.3

1.25

0.300375

氯化铵

53.49

2.5

0.133725

酪氨酸

181.19

2.5

0.452975

缬氨酸

117.15

2.5

0.292875

蛋氨酸

149.21

2.5

0.373025

异亮氨酸

131.17

2.5

0.327925

亮氨酸

131.17

2.5

0.327925

苯丙氨酸

165.19

2.5

0.412975

赖氨酸

146.19

2.5

0.365475

04、衍生步骤这个室温最好在什么范围比较好？

没有要求，只要保证在同一个环境下操作即可。

05、衍生化试剂能衍生化的最小和最大浓度值是多少？或衍生化范围值是多少？每个氨基酸衍生化的浓度范围都是一致的吗？该衍生方法的最高浓度是多少？ 

我们已知检测浓度在0.0025～2.5000μmoL/mL范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系，其他范围需要客户自行做线性考察。目前测试的最高浓度是方法包中提供的标准品的100倍。

06、方法包里面配制的对照品混合溶液，可以直接使用？那么各个氨基酸需要自己定位是吗？

对照品混合溶液也需要用衍生试剂来进行衍生后进样，若需要定位，需要自行购买单标定位。

07、方法包配套的使用方法是用外标法做吗？正亮氨酸是内标溶液吗，这个浓度有什么要求？

我们方法包的使用方法就是外标法。正亮氨酸是内标，我们不提供，正亮氨酸配制方法：称取正亮氨酸约10mg，加0.1mol/L 盐酸溶液 10mL溶解，混匀。

08、氨基酸的出峰顺序是按照方法包里面的色谱条件一次出的吗？

出峰顺序可以参考报告，一般顺序不会有改变的，除非衍生不当，导致出峰异常。

1.门冬氨酸   2.谷氨酸  3.丝氨酸  4.甘氨酸

5.组氨酸  6.精氨酸  7.苏氨酸  8.丙氨酸

9.脯氨酸  10.氯化铵  11.酪氨酸  12.缬氨酸

13.蛋氨酸  14.胱氨酸  15.异亮氨酸  16.亮氨酸

17.正亮氨酸  18.苯丙氨酸  19.赖氨酸

09、衍生步骤里面取下层溶液200+800μL之后，再取200μL+800μL这个是从已经反应后的混合溶液里面再取一次吗？然后最后这一步可以取400+1600μL吗？

需要按照我们的标准操作稀释，或者一步稀释取下层40μL+960μL，但是这样做的话误差会大一些，建议两步稀释更精确。分两步稀释时若想获取更多上机溶液，第二步可以取400+1600μL稀释。

10、试剂A、B的保质期，在稀释使用前需要跟稀释液一起放至室温吗？

试剂均需要放置冰箱冷藏保存，不开封冷藏是1年的保质期，开封以后冷藏是半年保质期。使用时需要恢复室温后取用，避免温差导致的移液误差。

11、流动相配制只能当天使用？不能延长时间吗？

流动相里面含有盐相，盐相最好是24小时更换一次，需要每天更换下流动相，避免长菌盐析等情况。

12、衍生化后的对照品溶液及样品溶液在多长时间内会发生降解？

根据实验人员经验，建议当天配液当天上机。

13、检测的时候，样品室的温度设置多少℃比较合适？

室温即可。

14、衍生化反应是否可以在塑料离心管内进行？

溶液体积较小，可以在子弹头式的尖底离心管内进行，方便分层取液。或使用便于分层的其他类型实验室常用的塑料离心管。

15、氨基酸样品是否能直接衍生？

游离氨基酸可以直接衍生，一般样品需要酸水解后再衍生。

16、不在所列18种内的其他氨基酸是否可以用此法衍生？

一般情况下都是可以的，但可能存在稳定性不好的情况，需客户测试。

17、酸水解后为何要氮吹？

氮吹是为了赶酸，衍生需在碱性条件下，大量酸存在会降低pH，影响衍生反应。

18、标准品用0.1mol/L盐酸配制的是否有影响？

0.1mol/L盐酸酸性不强，几乎没有影响。

19、看到报告上检测氯化铵，这个算氨基酸吗？

氯化铵不属于氨基酸，在标准溶液中自带有氯化铵，不能被去除，且会被检出。

氨基酸分析方法包产品信息

00840-01000 （含一支分析柱和1盒试剂盒）

00808-01034 方法包试剂盒（含以下产品）

货号

规格描述

00814-01027（A）

衍生试剂A，10mL/瓶

00814-01027（B）

衍生试剂B，10mL/瓶

00814-01030

衍生试剂的稀释剂，20mL/瓶

00815-01001

Amino Acid Standard 1*1mL，

Store at 2-8℃

作者：况熙

排版：赵林

审核：任兴发 李丽君

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