Monomix MC-NTA IMAC 亲和填料
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Monomix MC-NTA IMAC填料是一种金属亲和层析填料，适用于纯化组氨酸（His）标签的重组蛋白，这类重组蛋白广泛应用于生物技术领域。该填料以亲水性聚甲基丙烯酸酯微球为基质，粒径为60
Monomix MC-NTA IMAC填料是一种金属亲和层析填料，适用于纯化组氨酸（His）标签的重组蛋白，这类重组蛋白广泛应用于生物技术领域。该填料以亲水性聚甲基丙烯酸酯微球为基质，粒径为60 μm，孔径为1000 Å，具有较高的物理和化学稳定性。填料表面具有高度亲水性，最大程度地避免了与生物类样品的非特异性吸附。在亲水性表面，以专有连接物链接了能螯合多价金属离子的羧酸基团。
Monomix MC-NTA IMAC填料有两种类型：游离酸型 (Monomix MC-NTA CA)和螯合镍离子型 (Monomix MC-NTA Ni)。游离酸型可用于金属离子去除，也可根据客户要求定制其他金属离子型填料。这两种类型的IMAC填料结构如下图所示。Monomix MC-NTA IMAC填料可重复使用。
填料结构
图 1. Monomix MC60-NTA 化学组成示意图
Monomix MC60-NTA CA
Monomix MC60-NTA CA
图2. Monomix MC60-NTA Ni压力-流速曲线
建议使用纯水或NaCl溶液装柱；常用线性流速下，Monomix MC60-NTA Ni填料背压低
填料稳定性
该填料化学稳定高，可耐受0.1-0.5 M NaOH溶液清洗循环。该填料不耐EDTA及DTT。使用一段时间后需重新补充金属离子。
技术参数
| 填料类型 | Monomix MC60-NTA Ni Monomix MC60-NTA CA | |
|---|---|---|
| 基质 | 亲水性聚甲基丙烯酸酯 | |
| 粒径 | 60 µm | |
| 孔径 | 1000 Å | |
| 组氨酸标记蛋白(His-protein) 载量/离子交换当量 | ≥30 mg/mL填料 >100 μeq./mL | |
| 最大线性流速 | ≤1800 cm/h | |
| 操作温度 | ≤40°C | |
| pH适用范围 | 1-13 | |
| 操作压力 | ≤1 MPa(10 bar) | |
| 流动相兼容性 | 水溶液，或水和乙腈、丙酮或甲醇的混合物。常用缓冲液：磷酸盐、三羟甲基氨基甲烷(Tris)和醋酸盐，也与6 M盐酸胍、8 M尿素相容 | |
| 期保存方法 | 50% (v/v) ，保存于20%乙醇中 | |
| 再生 | 含0.1-0.5 M咪唑的缓冲盐体系 | |
| 清洗 | 0.1-0.5 M NaOH清洗 | |
应用案例
图3. Monomix MC60-NTA Ni纯化组氨酸标记蛋白
上样：样品泵进样30mg/mL，柱留时间5min，UV280nm信号值20mAU-20mAU收集。5min驻留时间。
淋洗：使用50mM PB，1M NaCl，pH8.0冲洗层析柱5CV，UV280nm信号值20mAU-20mAU收集。5min驻留时间。
再平衡：使用平衡液50mM PB，500mM NaCl，pH8.0再平衡层析柱3CV，5min驻留时间。
洗脱：使用洗脱液（ 50mM PB，500mM NaCl，500mM 咪唑，pH8.0）洗脱，8CV，5min驻留时间。UV280nm信号值20mAU-20mAU收集。
图4. 组氨酸标记蛋白SEC纯度
Column: Zenix SEC-300 (3μm, 300 Å, 4.6×300 mm)
Mobile phase: 150mM PB，pH 7.0
Flow rate: 1mL/min
Detector: UV 280 nm
Column temperature: 25 ℃
