说明

TempliPhi大载体DNA扩增试剂盒（TempliPhi LC试剂盒）专门用于制备BAC或fosmid DNA测序模板。 TempliPhi方法利用噬菌体Phi29 DNA聚合酶通过滚环扩增（RCA）指数扩增单链或双链环状DNA模板。该等温扩增方法在几小时内从pg级样品中扩增得到微克级DNA。极少量模板DNA的体外扩增消除了过夜细胞培养和常规质粒或M13 DNA纯化的需要。 Phi29 DNA聚合酶的校对活性确保了DNA高保真复制。

用于扩增的起始样品可以是少量含有BAC或fosmid DNA的细菌细胞，或任何环状DNA样品。可以从琼脂平板上挑取细菌菌落并直接添加到TempliPhi LC反应中。或者，微量的饱和细菌培养物或甘油冻存菌株可用作起始材料。无论起始材料的来源如何，均可在30°C 18小时内完成扩增，无需热循环。 TempliPhi Large Construct反应的产物是高分子量双链多联体。 TempliPhi Large Construct产品是双链DNA，可用正向和反向引物测序。通过TempliPhi Large Construct Amplification方法扩增的DNA可以直接用于循环测序反应而无需任何纯化。