概述
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔上预包被地西泮抗原，样本中残留的地西泮和此抗原竞争地西泮的抗体（抗试剂），加入酶标二抗（酶标物）后，经TMB底物显色，样本吸光值与其所含地西泮的含量呈负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样本中地西泮的含量。
适用范围
可定性、定量检测生鲜乳样本中地西泮的含量。
检测步骤
1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25°C）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封，保存于2～8°C。切勿冷冻。
3、洗涤液在使用前也需回温。
4、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
5、加标准品/样本：加入标准品/样本50μL，到对应的微孔中，然后加入地西泮抗试剂50μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25°C避光环境中反应30min。
6、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤液250 μL/孔，充分洗涤4～5次，每次间隔10s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。
7、加酶标物：加入地西泮酶标物100μL/孔，轻轻振荡混匀， 用盖板膜盖板后置25°C避光环境中反应15min，取出重复 步骤6。
8、显色：加入底物液A液50μL/孔，再加入底物液B液50μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25°C避光环境中反应15min。
9、测定：加入终止液50μL/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，请在5min内读完数据），测定每孔OD值(若无酶标仪，则不加终止液用目测法可进行判定)。
结果判定
请利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析（欢迎来电索取）。
注意事项
1、室温低于20°C或试剂及样本没有回到室温（20～25°C）会导致所有标准的OD值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3、每加一种试剂前需将其摇匀。
4、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。
5、不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6、储存条件保存试剂盒于2～8°C，不要冷冻，将不用的酶标板微孔板放进锡箔袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
7、试剂变质的迹象发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。
8、在加入底物液A液和底物液B液后，一般显色时间为15min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到20min，但不得超过20min。反之，则减短反应时间。
9、浓缩洗涤液如有结晶属正常现象，请加热溶解后使用。
10、该试剂盒最佳反应温度为25°C，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。
