概述
一、概要
地克珠利属三嗪苯乙腈化合物，为新型、高效、低毒抗球虫药，广泛用于鸡球虫病。对球虫主要作用峰期随球虫的不同种属而异，如对柔嫩艾美耳球虫主要作用点在第 2 代裂殖体球虫的有性周期；对巨型艾美耳球虫作用点在球虫的合子阶段； 对布氏艾美耳球虫小配子体阶段有高效；对巨型、布氏艾美耳球虫裂殖体无效。地克珠利对形成孢子化卵囊也有抑制作用。
本试剂盒是应用 ELISA 技术研发的新一代药物残留检测 产品，与仪器分析技术相比具有快速、简便、准确和灵敏度高等优点，操作时间需 35min，能减少操作误差和工作强度。
二、实验原理
地克珠利ELISA试剂盒采用间接竞争 ELISA 方法，在酶标板微孔上预包被地克珠利抗原，样本中地克珠利和此抗原竞争加入的酶标抗体（酶标物），经洗板后，与板孔上包被的抗原结合的酶标 抗体（酶标物）留在了板孔上，并经 TMB 底物显色，样本吸光值与其含有的地克珠利的量呈负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样本中地克珠利的含量。
三、适用范围
可定性、定量检测组织、牛奶等样本中地克珠利的含量。
检测步骤
1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25℃）平 衡 30min 以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放进原锡箔袋中 并且与提供的干燥剂一起重新密封，保存于 2～8℃。切勿 冷冻。
3、洗涤液在使用前也需回温。
4、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标 准品做 2 孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
5、加标准品/样本：加入标准品/样本 100µL 到对应的微孔中， 再加入酶标物 50µL/孔，然后加抗试剂 50µL/孔，轻轻振荡 混匀，用盖板膜盖板后置于 25℃避光环境中反应 30min。
6、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤液 250µL/ 孔，充分洗涤 4～5 次，每次间隔 10s，用吸水纸拍干（拍 干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。
7、显色：加入底物液 A 液 50µL/孔，再加底物液 B 液 50µL/ 孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置于 25℃避光环境中 反应 15min。
8、测定：加入终止液 50µL/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪 于 450nm 处（建议用双波长 450/630nm 检测，请在 5min 内读完数据），测定每孔 OD 值（若无酶标仪，则不加终 止液用目测法可进行判定）。
注意事项
1、室温低于 20℃或试剂及样本没有回到室温（20～25℃）会导 致所有标准的 OD 值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线 不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行 下一步操作。
3、每加一种试剂前需将其摇匀。
4、反应终止液为 2M 硫酸，避免接触皮肤。
5、不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的 试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起 灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6、储存条件 保存试剂盒于 2～8℃，不要冷冻，将不用的酶标板微孔板 放进锡箔袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感， 因此要避免直接暴露在光线下。
7、试剂变质的迹象 发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0 标准的 吸光度（450/630nm）值小于 0.5（A450nm<0.5）时，表示 试剂可能变质。
8、在加入底物液 A 液和底物液 B 液后，一般显色时间为 15min 即可。若颜色较浅，可延长反应时间到 20min，但不得超过 20min。反之，则减短反应时间。
9、浓缩洗涤液如有结晶属正常现象，请加热溶解后使用。
10、该试剂盒最佳反应温度为 25℃，温度过高或过低将导致检 测吸光度值和灵敏度发生变化。
