01 原理
T-2毒素免疫亲和柱测定的基础是抗原抗体反应,抗T-2毒素的单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上,样品中的T-2毒素经过提取、过滤、稀释,然后将样品提取液缓慢通过T-2毒素免疫亲和柱,在免疫亲和柱内,T-2毒素与抗体结合,洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。最后采用甲醇洗脱T-2毒素,然后进行相关分析。
02 净化程序
亲和柱活化→上样→淋洗→洗脱
活化:3mL柱管上方堵头直接连接20mL针筒固定后使用,弃去保存液;
上样:准确移取上述混匀滤液,注入针筒中,调节针筒压力使其以2秒/滴的速度缓慢通过免疫亲和柱,弃去;
淋洗:用20mL水冲洗柱子,流速1秒/滴,弃去流出液,直至2~3mL空气通过柱体,保证柱子内没有残余液体;
洗脱:用3mL甲醇洗脱并收集洗脱液于15mL 离心管中。50℃水浴氮气吹干洗脱液。用75%乙腈水溶液定容至1mL,过0.22μm有机滤膜,上机检。
03 色谱条件
色谱条件:
色谱柱:月旭Boltimate® C18,2.1×100mm,2.7μm。
流动相:流动相A:10mmol/L 乙酸铵溶液 流动相B:甲醇;
流速:0.2mL/min;
柱温:30℃;
进样量:2μL;
运行梯度:
质谱条件:
离子源:ESI;
检测方式:MRM;
干燥气:氮气,450℃,流速:1000L/Hr;
碰撞气:氩气;
离子喷雾电压:1.0kV。
04 色谱图及实际样品测定结果
05 结论
Welchrom® T-2毒素免疫亲和柱在《GB 5009.118-2016 食品安全国家标准 食品中T-2毒素的测定》标准下测试,样品加标回收率达到95.7%,满足实验要求。
06 产品信息