探索抗体蛋白的质控奥秘｜疏水作用色谱柱，让药物分析更高效

疏水相互作用色谱

疏水相互作用色谱 (Hydrophobic Interaction Chromatography，简称HIC) 是一种蛋白质分离、纯化和表征的传统技术。近些年来，随着单克隆抗体、双抗、三抗以及抗体偶联药物 (ADC) 的不断发展，HIC 在抗体以及抗体偶联药物的表征与分析上应用越来越广泛。

疏水作用色谱的方法开发

疏水作用色谱的方法开发一方面是色谱柱的选择，一方面是方法的优化。

与其他技术不同，疏水作用色谱技术允许蛋白质在非变性条件下保持天然结构进行分析。利用抗体蛋白类药物疏水相互作用色谱根据疏水性的不同进行分离。

色谱柱选择方面，疏水作用色谱柱的填料基质和键合相都可以影响选择性。对于填料基质而言，常见的HIC色谱柱既有硅胶基质的，也有聚合物基质。而键合相的差异，则主要影响疏水性，常见键合相的疏水性从弱到强依次是：丁基<辛基<苯基。

方法优化方面，疏水相互作用色谱一般是运行盐梯度。高浓度的缓冲盐，由于“占据水分子"导致蛋白质疏水内核发生翻转，疏水残基暴露出来，与键合相相互作用，而缓冲盐浓度降低的时候，疏水残基可逆的进行翻转，疏水作用减弱，从而洗脱。蛋白质分子按其疏水性大小被依次洗脱出来，疏水性小的先流出。具体的方法受到离子强度、溶剂种类、温度以及pH值的影响。

聚合物无孔HIC色谱柱

Shim-pack Bio HIC可用在低压力下实现ADC的DAR高分辨率分析。

ADC药物DAR分析

检测条件

系统: Inert LC（1.6 mL混合器）

工作站: LabSolutions™ LC/GC

色谱柱: Shim-pack Bio HIC (100mm.x 4.6 mmI.D., 4µm)

流动相: 

A) 50mM NaH2PO4-Na2HPO4（pH 7.0）含有1.5M（NH4）2SO4/2-丙醇（95/5）

B) 50mM NaH2PO4-Na2HPO4（pH 7.0）/2-丙醇（80/20）

梯度: 0%B (0-1min), 0-100%B (1-18min), 100%B (18-23min)

流速: 1.0mL/min

进样量: 5µL

柱温: 25°C

检测器: 280nm (PDA)

样品: Cysteine-liked ADC Mimic (5 mg/mL)

Peak area reproducibility（n = 6）

_

%RSD

DAR0

5.98

DAR2

2.57

DAR4

1.62

DAR6

2.23

DAR8

2.87

峰使用i-peak finder（LabSolutions的峰值积分算法）自动进行积分。

产品信息

P/N

227-31174-01

描述

Shim-pack Bio HIC butyl，

100 x 4.6 mm I.D.,4µm 

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