食品中三氯蔗糖的测定——HPLC法解决方案

三氯蔗糖又名三氯半乳蔗糖，俗称蔗糖素，由英国泰莱公司(Tate&Lyie)与伦敦大学共同研制并于1976年申请专利的一种新型甜味剂。由于其具有甜度高(甜度为蔗糖的600倍)、甜味纯正等特点，被认为是目前最优秀的功能性甜味剂之一，代表了目前强力甜味剂研究的最高水平。虽然科学家们经过长期的毒理实验证明其具有较高的安全性，但也有三氯蔗糖可诱发偏头疼发作的报道。

建立食品中三氯蔗糖的测定方法，可为食品生产企业提供生产性指导，并为质量监督部门提供食品质量监管依据。我国国家标准《GB 22255-2014 食品安全国家标准 食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定》中制定了三氯蔗糖的HPLC-ELSD检测方法。

方法优势：

迪马科技在参考国家标准《GB 22255-2014 食品安全国家标准 食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定》基础上，进行了方法优化，推出《食品中三氯蔗糖的测定》方法，该方法：

 

1. 采用固相萃取-高效液相色谱法测定食品中的三氯蔗糖，使用ProElut PLS 固相萃取柱净化样品，通过HPLC-ELSD检测；

2. 前处理步骤简单、净化效果好、重现性好，定量限7.5 mg/kg，符合《GB 22255-2014 食品安全国家标准 食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定》对三氯蔗糖的限量规定；

3. 适用于各省市出入境、质检、疾控、食品药品检验所、第三方检测机构、食品检测机构、大型食品生产商、高校和科研院所等。

以下为详细解决方案，敬请参考！

食品中三氯蔗糖的测定——HPLC法

1、适用范围                                                                                        

本方案适用于液态奶、酸奶、酱油、醋、饼干、奶酪、奶茶、可乐和果冻中三氯蔗糖的检测，方法定量限7.5 mg/kg。

2、标准品配制

标准储备溶液：准确称取标准品，用水配制成10 mg/mL的储备液，吸取一定体积10 mg/mL储备液用水配成浓度为1000 μg/mL的储备液。

3、提取

3.1 含蛋白脂肪类液体：液态奶、酸奶、酱油和醋

10 mL样品，加入8 mL 水和2 mL 200 g/L乙酸铅溶液，振荡2 min，超声提取5 min，6000 rpm离心5 min，取10 mL上清液，待净化；

3.2 含蛋白脂肪类固体：饼干、奶酪和奶茶

5 g样品，加入8 mL 水和2 mL 200 g/L乙酸铅溶液，振荡2 min，超声提取5 min，6000 rpm离心5 min，取10 mL上清液，待净化；

3.3 饮料：可乐（量取前超声排气泡）

10 mL样品，加入10 mL 水，混匀，取10 mL，待净化；

3.4 果冻

5 g样品，加入5 mL 水，热水超声溶解，混匀，趁热净化。

注：《GB 22255-2014 食品安全国家标准 食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定》中提取液为75%甲醇水溶液，减压浓缩过程中暴沸严重，不易操作。

4、净化——ProElut 200 mg/6 mL PLS（Cat.#：68012）

 

(1)活    化：	依次向柱中加入5 mL甲醇、5   mL水，弃去流出液；
(2)上    样：	将待净化液加入柱中，弃去流出液（控制流速不超过每秒1滴）；
(3)淋    洗： (4)洗    脱：	向柱中加入5 mL   20%甲醇水溶液，弃去流出液； 向柱中加入3 mL甲醇，收集流出液；
(5)定    容：	将洗脱液在50 ℃下减压蒸干，用流动相定容至1 mL，供HPLC分析。

5、色谱条件

色谱柱：Diamonsil C18(2) 150 × 4.6 mm，5 μm（Cat.#：99601）

流速：1.0 mL/min

进样量：20 μL

柱温：35 ℃

检测器：SEDEX LT-ELSD，温度：40℃，压力：3.5 bar，Gain：6

流动相：A：水；B：乙腈

梯度设置

 

时间/Min.	0	14	15	22	23	30
A（%）	89	89	10	10	89	89
B（%）	11	11	90	90	11	11

6、添加回收结果

食品中三氯蔗糖的HPLC检测的添加回收结果

 

	添加水平200 mg/kg		添加水平20 mg/kg		添加水平7.5 mg/kg		空白含量(μg/mL)
	回收率(%)	加标量	回收率(%)	加标量	回收率(%)	加标量
早餐奶	99.01	10 mg/mL 200 μL	109.82	1000 μg/mL 200 μL	96.52	1000 μg/mL 75 μL	—
巧克力奶	99.70	10 mg/mL 200 μL	100.91	1000 μg/mL 200 μL	95.88	1000 μg/mL 75 μL	—
咖啡奶	100.34	10 mg/mL 200 μL	112.34	1000 μg/mL 200 μL	126.00	1000 μg/mL 75 μL	—
养乐多	128.83	10 mg/mL 200 μL	—	—	—	—	130.8
酸奶	—	—	105.58	1000 μg/mL 200 μL	123.42	1000 μg/mL 75 μL	—
酱油	77.85	10 mg/mL 200 μL	—	—	—	—	113.48
醋	108.22	10 mg/mL 200 μL	143.64	1000 μg/mL 200 μL	205.47	1000 μg/mL 75 μL	—
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