其它生化试剂
用于在酵母中表达的载体
| 品牌 | 厂商性质 | 产地 | 货期 |
|---|---|---|---|
| 暂无 | 暂无 | 暂无 | 现货 |
AI问答
配套的仪器设备？
可以搭配的相关耗材试剂？
产品介绍
IBA现供应两种带有Strep-tagÒ和瑞士Dualsystems Biotech AG（www.dualsystmes.com）的HA epitope-tag的酵母载体。
特点：
1、高水平、可诱导的表达
2、无需加入用于诱导的试剂或改变培养基
3、导受紧密调控使表达毒性蛋白质
载体pKS1-ST和pKS2-ST组合了蛋白质表达的两个重要特点：
1、诱导的ADH2启动子：ADH2启动子受培养基中葡萄糖缺失的诱导。在早期生长过程中，葡萄糖充裕，启动子无活性，因此防止对酵母生长的负效应。当细胞到达静止早期时，葡萄糖被培养基耗尽，ADH2启动子被诱导，产生大量蛋白质。
2、anMX表达框：不象其他酵母表达载体，pKS-ST载体特有一个KanMX表达框，使得可以在丰富培养基中以G418筛选。丰富培养基如YPD的使用将显著增强细胞密度和蛋白质产量。
比较所有Strep-tagÒ, 6´Histidine-tag及double-tag载体
| 质粒 | Strep-tag | 6xHis -tag | HA epitope-tag | 分泌 | Tag去除 | 蛋白酶 | 抗性 | 目录号 |
| 大肠杆菌载体:具有tet启动子用于胞质外周表达 | ||||||||
| pASK-IBA2 | C-端 | - | - | Yes | No | - | Amp | 2-1301-000 |
| pASK-IBA4 | N-端 | - | - | Yes | No | - | Amp | 2-1303-000 |
| pASK-IBA6 | N-端 | - | - | Yes | Yes | factor Xa | Amp | 2-1305-000 |
| pASK-IBA12 | N-端 | - | - | Yes | Yes | thrombin | Amp | 2-1311-000 |
| pASK-IBA14 | N-端 | - | - | Yes | Yes | enterokinase | Amp | 2-1313-000 |
| pASK-IBA32 | - | C-端 | - | Yes | No | - | Amp | 2-1332-000 |
| pASK-IBA44 | N-端 | C-端 | - | Yes | No | - | Amp | 2-1344-000 |
| 大肠杆菌载体:具有tet启动子用于细胞质表达 | ||||||||
| pASK-IBA3plus | C-端 | - | - | No | No | - | Amp | 2-1402-000 |
| pASK-IBA5plus | N-端 | - | - | No | No | - | Amp | 2-1404-000 |
| pASK-IBA7plus | N-端 | - | - | No | Yes | factor Xa | Amp | 2-1406-000 |
| pASK-IBA13plus | N-端 | - | - | No | Yes | thrombin | Amp | 2-1412-000 |
| pASK-IBA15plus | N-端 | - | - | No | Yes | enterokinase | Amp | 2-1414-000 |
| pASK-IBA17plus | N-端 | - | - | No | Yes | TEV protease | Amp | 2-1416-000 |
| pASK-IBA33plus | - | C-端 | - | No | No | - | Amp | 2-1433-000 |
| pASK-IBA35plus | - | N-端 | - | No | No | - | Amp | 2-1435-000 |
| pASK-IBA37plus | - | N-端 | - | No | Yes | factor Xa | Amp | 2-1437-000 |
| pASK-IBA43plus | C-端 | N-端 | - | No | No | - | Amp | 2-1443-000 |
| pASK-IBA45plus | N-端 | C-端 | - | No | No | - | Amp | 2-1445-000 |
| pASK-IBA63a-plus | C-端 | - | - | No | No | - | Amp | 2-1463-100 |
| pASK-IBA63b-plus | C-端 | - | - | No | No | - | Amp | 2-1463-200 |
| pASK-IBA63c-plus | C-端 | - | - | No | No | - | Amp | 2-1463-300 |
| pASK-IBA65b-plus | N-端 | - | - | No | No | - | Amp | 2-1465-200 |
| 大肠杆菌载体:具有tet启动子和氯霉素抗性（CAT） | ||||||||
| pASK-IBA2C | C-端 | - | - | Yes | No | - | CAT | 2-1321-000 |
| pASK-IBA3C | C-端 | - | - | No | No | - | CAT | 2-1322-000 |
| pASK-IBA4C | N-端 | - | - | Yes | No | - | CAT | 2-1323-000 |
| pASK-IBA5C | N-端 | - | - | No | No | - | CAT | 2-1324-000 |
| pASK-IBA6C | N-端 | - | - | Yes | Yes | factor Xa | CAT | 2-1325-000 |
| pASK-IBA7C | N-端 | - | - | No | Yes | factor Xa | CAT | 2-1326-000 |
| 大肠杆菌载体:具有T7启动子 | ||||||||
| pPR-IBA1 | C-端 | - | - | No | No | - | Amp | 2-1390-000 |
| pPR-IBA2 | N-端 | - | - | No | No | - | Amp | 2-1391-000 |
| 哺乳动物载体：具有人CMV启动子 | ||||||||
| pEXPR-IBA3 | C-端 | | - | No | No | - | Amp/Neo | 2-1903-000 |
| pEXPR-IBA5 | N-端 | | - | No | No, | - | Amp/Neo | 2-1905-000 |
| pE, XPR,, , ,, -I, B, A7<, /DIV> | N-端 | | - | No | Yes | factor Xa | Amp/Neo | 2-1907-000 |
| pEXPR-IBA13 | N-端 | | - | No | Yes | thrombin | Amp/Neo | 2-1913-000 |
| pEXPR-IBA15 | N-端 | | - | No | Yes | enterokinase | Amp/Neo | 2-1915-000 |
| pEXPR-IBA17 | N-端 | | - | No | Yes | TEV protease | Amp/Neo | 2-1917-000 |
| pEXPR-IBA42 | C-端 | N-端 | - | Yes | No | - | Amp/Neo | 2-1942-000 |
| pEXPR-IBA43 | C-端 | N-端 | - | No | No | - | Amp/Neo | 2-1943-000 |
| pEXPR-IBA44 | N-端 | C-端 | - | Yes | No | - | Amp/Neo | 2-1944-000 |
| pEXPR-IBA45 | N-端 | C-端 | - | No | No | - | Amp/Neo | 2-1945-000 |
| 酵母载体：具有ADH2启动子 | ||||||||
| pKS1-ST | N-端 | - | N-端 | No | No | - | Amp/G418 | 2-3801-000 |
| pKS2-ST | N-端 | - | N-端 | Yes | No | - | Amp/G418 | 2-3802-000 |
每个载体的规格：5ｕg
| 产品 | 规格 | 目录号 |
| 测序引物 | ||
| pASK-IBA载体：上游测序引物 | 1nmol, 10pmol/ul, HPLC纯化 | 5-0000-101 |
| pASK-IBA载体：下游测序引物 | 1nmol, 10pmol/ul, HPLC纯化 | 5-0000-102 |
| pASK-IBA载体：上、下游测序引物 | 1nmol each, 10pmol/ul, HPLC纯化 | 5-0000-104 |
| pPR-IBA载体：上游测序引物 | 1nmol, 10pmol/ul, HPLC纯化 | 5-0000-111 |
| pPR-IBA载体：下游测序引物 | 1nmol, 10pmol/ul, HPLC纯化 | 5-0000-112 |
| pPR-IBA载体：上、下游测序引物 | 1nmol each, 10pmol/ul, HPLC纯化 | 5-0000-114 |
| pEXPR-IBA载体：上游测序引物 | 1nmol, 10pmol/ul, HPLC纯化 | 5-0000-121 |
| pEXPR-IBA载体：下游测序引物 | 1nmol, 10pmol/ul, HPLC纯化 | 5-0000-122 |
| pEXPR-IBA载体：上、下游测序引物 | 1nmol each, 10pmol/ul, HPLC纯化 | 5-0000-124 |
除了表达载体，IBA还提供围绕Strep-tag用于蛋白质纯化、检测、分析（蛋白质固定）、蛋白质：蛋白质相互作用研究以及高通量纯化的完整的产品组合。
| The tag | 技术 | 蛋白质 |
| 仅8个氨基酸 平衡的氨基酸组成 – 对蛋白质的结构和活性一般没有影响 高选择性和易于控制的结合属性 C-或N-末端融合 无需去除 | 有效和通用的表达载体，标准化的克隆策略 生理条件下的亲和层析 通过颜色改变可见柱再生和活性状态（见下） 可获得超过99%的纯度 | Strep-tag适用于： 金属蛋白 膜蛋白 具有多个亚单位的敏感蛋白质复合体 以及其他任何蛋白质 |
| 结合： GFP Strep-tag 蛋白结合于Strep-Tactin | | 洗脱： 用脱硫生物素 | | 再生（颜色控制）： 开始去除脱硫生物素 | | 再生： 脱硫生物素被完全除去 | | 再生： 用平衡缓冲液快速再生 |
纯化在E. coli 中过度表达的GFP-Strep-tag II 融合蛋白
图片(从左至右)：1、GFP-Strep-tag II融合蛋白特异结合在Strep-Tactin SepharoseÒ柱上，而非特异性蛋白质被少量生理性洗涤缓冲液迅速洗去。2、由于加入特异性竞争剂脱硫生物素，Strep-tag蛋白被洗脱。3-5、柱再生：脱硫生物素被黄色溶液HABA取代，后者一旦与Strep-Tactin复合即变为红色。HABA随后被洗涤缓冲液除去，柱子可被重新使用。
怎样获得优良无比的纯化因素
Strep-tag® 纯化系统是基于Strep-tag II肽和特殊设计的Strep-Tactin（streptavidin的变体）之间高选择性和极易控制的相互作用而建立起来的蛋白纯化系统。Strep-tag II对Strep-Tactin的结合亲和力比对streptavidin高将近100倍。在亲和纯化过程中，附了tag的蛋白质结合在被固定了的Strep-Tactin上。生理缓冲液如PBS可与一系列添加剂一起用于该纯化过程。短暂的洗涤步骤之后，在同一缓冲液中加入脱硫生物素（2.5 mM）即可将纯化的重组蛋白温和地洗脱下来。脱硫生物素是一种便宜的、可逆结合的、稳定的生物素类似物，而生物素是streptavidin的天然配体。这种竞争性洗脱是赋予特异性的第二步，从而得到优良无比的纯化因素。该系统安全、易于使用；纯化柱再生和活性状态可以通过纯化柱上的颜色改变来观察到。
Strep-tag融合蛋白可以经Western blots, ELISA, 电子或荧光显微镜进行方便的检测。有相应的Strep-Tactin酶共轭物和抗Strep-tag II的单克隆抗体供出售。
Strep-tag®II对蛋白质的影响可以忽略
此8个氨基酸的短肽tag由于具有化学平衡的氨基酸组成（WSHPQFEK），因此对重组蛋白的影响可以忽略不计。该tag可以被置于C-端或N-端。建议在蛋白和tag之间加入2个氨基酸的间隔以确保tag的可接近性。总的来说，该tag不干扰蛋白质的折叠或生物活性、不与重金属离子缓冲液杂质反应、无离子交换属性、不会诱导蛋白质聚集。因此无需去除该tag。
Strep-Tactin®：长效的亲和柱
Strep-Tactin是streptavidin的一种衍生物，是已知最稳定的蛋白质之一。Streptavidin对以8 M urea或guanidine, 0.5 M NaOH以及50 % formamide (t = 1 h; T = 37 °C)的处理保持稳定。蛋白酶(胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、嗜热菌蛋白酶和弹性蛋白酶等) 在1:50 w/w比例下，37 °C孵育2小时都无法切割 streptavidin。当SDS存在时，仅在温度高于60 °C时，streptavidin才开始降解成单体。经过测试，Strep-Tactin已经被证实具有上述作为长效亲和柱必备的卓越特性，可被重复使用3-5次。而且，Strep-Tactin的中性PI值使非特异性蛋白质或核酸的结合降到最低。
Strep-Tactin树脂技术指标
有5种版本Strep-Tactin树脂，区别在于其特性和应用。Strep-Tactin Sepharose®优先用于重力流层析；Strep-Tactin Superflow®和Strep-Tactin MacroPrep® 也可用于低压力或FPLC；Strep-Tactin POROS® (20和50)用于FPLC和HPLC层析。每个基质都会表现出不同的非特异性结合性质，当使用某种基质由于非特异性背景而无法获得满意结果时，建议换用其它的基质（亦请见Strep-Tactin Column Evaluation Sets）。此外Superflow尤其适用于增加的流速，也适用于大的蛋白质复合物的纯化。
请注意，Strep-Tactin树脂被优化用于柱亲和层析，而不适用于批量纯化。批量纯化请使用IBA的MagStrep Strep-Tactin包被的磁珠。
表1: 与Strep-tag/Strep-Tactin相互作用兼容的试剂
| 试剂 | 浓度 |
| Reduction Agents | |
| DTT | 50 mM |
| β-mercaptoethanol | 50 mM |
| Non-Ionic Detergents | |
| C8E4 Octyltetraoxyethylene | 最高0.88 % |
| C10E5; Decylpentaoxyethylene | 0.12 % |
| C10 E6 | 0.03 % |
| C12 E8 | 0.005 % |
| C12E9; Dodecyl nonaoxyethylene (Thesit) | 0.023 % |
| DM; Decyl-β-D-maltoside | 0.35 % |
| LM; N-dodecyl β-D-maltoside | 0.007 % |
| NG; N-nonyl-β-D-glucopyranoside | 0.2 % |
| OG; N-octyl-β-D-glucopyranoside | 2.34 % |
| TX; Triton X-100 | 2 % |
| Tween 20 | 2 % |
| Ionic Detergents | |
| N-lauryl-sarcosine | 2 % |
| 8-HESO;N-octyl-2-hydroxy-ethylsulfoxide | 1,32 % |
| SDS; Sodium-N-dodecyl sulfate | 0.1 % |
| Zwitter-Ionic Detergents | |
| CHAPS | 0.1 % |
| DDAO; N-decyl-N,N-dimethylamine-N-oxide | 0.034 % |
| LDAO; N-dodecyl-N,N-dimethylamine-N-oxide | 0.13 % |
| 其它 | |
| Ammonium sulfate (NH4)2SO4 | 2 M |
| CaCl2 | 最高1 M |
| Ethanol | 10% |
| EDTA | 50 mM |
| Guanidine | 最高1 M |
| Glycerol | 最高25 % |
| Imidazole | 最高250 mM |
| MgCl2 | 1 M |
| NaCl | 5 M |
| Urea | 最高1 M |
注意：这些试剂在高达上述浓度下已成功用于纯化如GAPDH-Strep-tagÒ。未标注“最高”的试剂，也许可以使用更高浓度。由于结合依赖于Strep-tag在特殊蛋白质中的空间可及性，所给的浓度值对于其他蛋白质可能有偏差。
用于在酵母中表达的载体信息由盛世中方（北京）生物科技有限公司为您提供，如您想了解更多关于用于在酵母中表达的载体报价、型号、参数等信息，欢迎来电或留言咨询。
注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途