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Tet表达系统

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产品介绍

特点和优点:

1、以pASK-IBA载体在大肠杆菌中高水平表达

2、由于tet启动子而使表达受到紧密调控

3、增加细胞毒性基因的稳定性

4、通用的克隆策略,只需一个限制性内切酶

5、N-端或C-端Strep-tag II融合

6、N-端或C-端6xHistidine-tag融合

7、Strep-tag II/6xHistidine-tag双标记载体

8、胞液或外周胞质中表达

9、无水四环素(anhydrotetracycline,AHT)诱导表达

10、氨卞青霉素或氯霉素抗性

原理和特性

  pASK-IBA载体与受紧密调控的tet启动子一起工作。tet抑制子在pASK-IBA质粒上编码,并分别从beta-内酰胺酶启动子或氯霉素乙酰基转移酶启动子组成型表达。这种特殊的安排保证了抑制分子和质粒拷贝数之间平衡的化学计量。在低浓度无水四环素的有效化学诱导下,外源基因表达受到的严格抑制才得以解除。与lac启动子(有漏洞、易受分解代谢产物(cAMP水平,代谢状态)的抑制以及受染色体编码的抑制分子的影响)相比,tetA启动子/操纵子受到紧密调控,不与任何细胞调节机制或遗传背景有功能上的偶联。

  因此,无需特殊大肠杆菌菌株或额外质粒,多种培养基和培养条件下都可以应用。例如,葡萄糖基础培养基甚至XL 1-Blue菌株(携带四环素抗性基因的一个附加拷贝),也可用于表达。pASK-IBA表达系统在发酵等多种条件下非常稳定,操作方便。

  细胞质pASK-IBA载体现以“plus”版本提供。这种新版本包含改良的翻译起始位点以增加一级蛋白质产量,而“plus”载体(如pASK-IBA3plus)的其余序列与其“非plus”前体(如pASK-IBA3)相同。“非plus”版载体从现在开始仅按需供应。

  载体的更多元件包括一个前后串联的核糖体结合位点(RBS),保证翻译的有效起始;脂蛋白基因的强终止子,以避免通读;噬菌体f1的基因间区域,以提供一种制备单链DNA的方法;以及一个beta-内酰胺酶或氯霉素乙酰基转移酶基因*。这些载体均不介导抗四环素抗性。

 

*使用带beta-内酰胺酶抗性基因的克隆载体可能会有某些局限性,因为氨苄青霉素在细菌培养基里降解的相当快。因此,我们现在以氯霉素抗性取代氨苄青霉素抗性供应Strep-tag II载体pASK-IBA2C至pASK-IBA7C。

 

参考文献:

Skerra, A. (1994). Use of the tetracycline promoter for the tightly regulated production of a murine antibody fragment in Escherichia coli. Gene, 151, 131-135.

 

  以下大肠杆菌菌株已与pASK-IBA载体一起成功用于Tet表达:JM83, WK6, B, BL21, MG1655, W3110, BL21(DE3), BLR(DE3), XL1-Blue, BL21-CodonPlusTM-RIL

  对于分泌型蛋白,我们推荐JM83。对于胞质表达我们推荐大肠杆菌B菌株,因为它们缺乏离子蛋白酶和ompT外膜蛋白酶,后两者能在纯化过程中降解蛋白质(Grodberg and Dunn, 1988, J.Bacteriol. 170, 1245)。

请注意我们不知道有与Tet表达系统不兼容的大肠杆菌菌株。

 

无水四环素:tetA启动子诱导剂

  Strep-tag/Strep-Tactin 过度表达系统的大肠杆菌表达框受tetA启动子/操纵子和抑制子的转录调控。启动子被低浓度无水四环素(AHT)诱导,既节省费用也使AHT的抗菌影响降到最低。Degenkolb 等 (1991) 研究表明,AHT 对tet抑制子的结合比四环素对tet抑制子的结合紧密35倍。

参考文献:

Degenkolb J, Takahashi M, Ellestad GA, Hillen W, 1991:Antimicrob. Agents Chemother. 35, No 8, 1591-1595 Structural requirements of tetracycline-Tet repressor interaction: Determination of equilibrium binding constants for tetracycline analogues with the Tet repressor.

Tet表达系统信息由盛世中方(北京)生物科技有限公司为您提供,如您想了解更多关于Tet表达系统报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。

注:该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案,不可用于临床诊断或治疗等相关用途