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TaqDNAPolymerase

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产品介绍

概述
    TaqDNA Polymerase是一种热稳定的DNA聚合酶,来源于嗜热细菌Thermus aquaticus。该酶具有5′-3′DNA聚合酶活性,还具有较低的5′-3′ 核酸外切酶活性,没有3′-5′的外切酶活性,在PCR产物的3′ 末端会加一个“A”,可用于TA克隆。
 
应用
 
   1.常规PCR扩增反应,可扩增长达6kb的DN**段,通常适合扩增长度3kb以下的片段。
   
   2.平端PCR产物3′ 末端加“A”。
    
   3.DNA测序。
     
   4.DNA3′ 末端标记。


来源
   来源于Thermus aquaticusYT1的TaqDNA Polymerase基因的重组E. coli菌株。
 
活性单位定义
    1单位(U)TaqDNA Polymerase活力定义为在72℃条件下,30min内,以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,催化掺入10nmol 脱氧核苷酸成为酸不溶性物质所需的酶量。
 
贮存条件
    20 mMTris-HCl (pH8.0),100 mMKCl,0.1 mMEDTA,0.1 % NP-40 (v/v),0.1 % Tween-20 (v/v),1 mMDTT,50 %甘油(v/v),-20°C贮存。

10×TaqBufferwith Mg2+
     100 mM Tris-HCl (PH 8.8)
     500 mMKCl
     15 mMMgCl2
     1% Triton X-100

常规PCR反应条件
     一.室温融化反应所需溶液后混匀并短暂离心至管底,连同TaqDNA聚合酶一起置于冰上。
     二.按如下PCR反应体系(50μl)混合各溶液:

 

Template DNA ×μl
ForwardPrimer(10 μM) 1 μl
ReversePrimer(10 μM) 1 μl
dNTP Mixture(10 mMeach) 1 μl
10×Taq Buffer(with Mg2+ 5 μl
TaqDNA Polymerase(5U/μl) 0.25 μl
灭菌ddH2O up to 50 μl
                       注①:50μl PCR反应体系中模板DNA推荐使用量:
人类基因组DNA 50~500ng
大肠杆菌基因组DNA 5~50ng
λDNA 0.5~10ng
质粒DNA 0.1~5ng
                        ②:可以使用不含Mg2+的反应buffer,并根据需要自行添加MgCl2达到Mg2+ 的最适反应浓度。
      三.轻轻混匀反应液并短暂离心至管底,如果PCR仪没有热盖可加入一半体积的矿物油。 
      四.将PCR管放入PCR仪中,设置并运行PCR反应条件如下:
步骤 温度 时间 循环次数
预变性 94℃ 3~5min 1
变性 94℃ 30s 25~35
退火 Tm-5℃ 30s
延伸 72℃ 1min/kb
最后延伸 72℃ 5~15min 1
           注:PCR反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异,在具体操作中需要根据模板类型、目的片段大小、扩增片段的碱基序列和引物的GC含量及长短等具体情况来设计最佳的反应条件,包括退火温度,延伸时间等。
 
质量控制
    纯度检测:经SDS-PAGE检测纯度大于95%。
    核酸内切酶检测:10U Taq DNA聚合酶与500ng λDNA在1×Taq buffer中37℃共同孵育16h,0.8%琼脂糖电泳检测,DNA没有出现降解和被切断表示通过该项检测。
    核酸外切酶检测:10U Taq DNA聚合酶与200ng 50 bp ssDNA在1×Taq buffer中37℃共同孵育16h,15%变性PAGE胶电泳检测,DNA没有出现降解,表示通过该项检测。
    大肠杆菌DNA污染检测:
     PCR 产物:544 bp
     Forward primer:5-GGAAGAAGCTTGCTTCTTTGCTGAC-3
     Reverse primer:5-AGCCCGGGGATTTCACATCTGACTTA-3
     PCR程序:94°C, 3 min; 35 cycles( 94°C, 30 sec; 55°C, 30 sec; 72°C, 45 sec); 72°C, 7 min
     0.8%琼脂糖电泳检测没有544bp产物出现,表明通过该项检测。
     质粒污染检测:
     T7 Promoter Primer:5’-TAATACGACTCACTATAGGGAGA-3
     T7 terminator Primer:5’-TATGCTAGTTATTGCTCAG-3
     PCR程序:94°C, 3 min; 35 cycles( 94°C, 30 sec; 55°C, 30 sec; 72°C, 45 sec); 72°C, 7 min
     0.8%琼脂糖电泳检测没有PCR产物条带出现,表明通过该项检测。
    支原体污染检测:
     PCR产物::717 bp
     GPO-1 :5’-ACTCCTACGGGAGGCAGCAGTA-3
     MGSO :5’-TGCACCATCTGTCACTCTGTTAACCTC-3
     PCR程序::94°C, 3 min; 35 cycles( 94°C, 30 sec; 55°C, 30 sec; 72°C, 45 sec); 72°C, 7 min
      0.8%琼脂糖电泳检测没有PCR产物条带出现,表明通过该项检测。

TaqDNAPolymerase信息由深圳华因康基因科技有限公司为您提供,如您想了解更多关于TaqDNAPolymerase报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。

注:该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案,不可用于临床诊断或治疗等相关用途