ICR Swabs 对隔离器手套表面低水平微生物的检测应用

在日常的环境监测中，接触碟法和棉签擦拭法是对药品无菌灌装线进行表面微生物监测的常用方法，在现行的欧洲和美国 GMP 指南中都均有推荐和介绍，但由于取样方法、试验表面和测试微生物的不同，擦拭法和接触碟取样在微生物的回收率上会存在一些差异。

这种差异在 USP <1116> 中也有说明，但两种方法都可检测低水平的微生物污染，尤其是在 A 级洁净区和隔离器中。

目前，使用隔离器进行药品的生产，已成为制药行业的一种显著趋势，因此对隔离器中的试验表面进行微生物检测是十分必要的，尤其是隔离器专用的 Neoprene®手套。因此，为证明 ICR Swabs 取样拭子可有效的检测出隔离器 Neoprene®手套表面的低水平微生物污染，我们进行了专门的实验研究。

材料和方法

将 Neoprene®手套试样清洁并高压灭菌。取 4 种试验微生物在两种不同稀释度的菌悬液，在试样表面接种，使其均匀分布。表 1 列出了所选取的试验微生物以及接种在测试表面的菌落数 CFU。革兰氏阴性菌的接种量会更高一些，因为它们对接种表面材料的干燥过程更为敏感。

使用平板涂布法在 90 mm TSA 平板上接种，以确定接种在试样表面的菌落数 CFU。

表 1：所选取的试验菌株和接种在 100ul 菌悬液中的菌落数 CFU

接下来，在超净工作台中，我们将每个表面试样干燥 60 分钟，并用以下不同方法对干燥后的表面试样上的试验微生物进行 3 次重复检测，操作步骤描述如下，如图 1 所示。

1）接触碟法：用胰酪大豆胨琼脂培养基接触碟（含卵磷脂、聚山梨酯 80、组氨酸和硫代硫酸钠）对干燥表面试样进行取样，在测试表面均匀按压 10 秒。所有平板都在 30–35°C 培养长达七天，并每日进行菌落计数。

3）棉签擦拭法：用已预湿润的 ICR Swabs 取样拭子头在干燥表面上小心沿水平和垂直方向擦拭取样。随后将 ICR Swabs 顶部的 TSB 液体培养基挤进拭子头的试管中，由于干燥可能会延长微生物生长的迟缓期，所以将 Swabs 取样拭子 30–35°C 培养长达七天，并每日目视检查观察试管的浊度情况。

培养长达 7 天并每日进行观察（ICR 接触碟通过菌落数 CFU 来计数，Swabs 取样拭子通过观察培养基浊度测定）

图 1. 通过 TSA w. LTHThio contact-ICR+接触碟和 ICR Swabs 取样拭子对隔离器 Neoprene 手套试样表面上的微生物检测的操作步骤

结果和讨论

使用 ICR Swabs 取样拭子与 ICR 接触碟在隔离器 Neoprene 手套表面取样的检测率

为确认 ICR Swabs 取样拭子可以有效的检测到 Neoprene®手套表面的低水平微生物，我们将试验中呈阳性的 ICR Swabs 试样与 ICR 接触碟进行了比较。如图 2 所示，ICR Swabs 和 ICR 接触碟所呈现的阳性（22）样品总数相同。

在 Neoprene 表面接触碟和 ICR Swabs 取样拭子的阳性试样数量

图 2：使用 ICR 接触碟和 ICR Swabs 取样拭子在隔离器 Neoprene®手套表面取样的阳性样品检测率及接种试验菌株的平均菌落数 CFU

在接种特定试验菌株的菌悬液样品中，使用接触碟都检测到了 ≥ 5CFU 的情况，ICR Swabs 取样拭子也都为阳性，如金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌样品（见表 2）。在检测大肠杆菌样品时，接触碟有检测到菌落数为 2CFU 和 1CFU 的情况，而 ICR Swabs 取样拭子的检测结果为 3 组均显示阳性结果。

表 2：ICR 接触碟在隔离器 Neoprene®手套表面取样的微生物菌落数 CFU 回收率及 ICR Swabs 取样拭子呈阳性的样品数量结果

结论

本研究的结果表明，ICR Swabs 取样拭子可有效检测隔离器 Neoprene®手套表面低水平革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的微生物污染，并表现出可靠的生长结果。（这一段需要文本化处理）

ICR Swabs 取样拭子和我们常见的棉签不同。

首先，它使用三层无菌包装，且最内层包装可耐受 VHP 灭菌；

其次，采用聚酯的采样头，并且已使用无菌氯化钠溶液预润湿，采样后在表面没有残留，使用后表面也无需清洁；

再次，拭子头部预灌装了含中和剂的 TSB，采样后折断阀门，TSB 会直接流入下面的试管，不需要再转移拭子。

最后，按照法规的要求，A 级区表面是不得检出微生物的，ICR Swabs 可对表面擦拭进行阴阳性的检查，可有效的解决拭子采样回收率的问题，也很好的解决了由于操作步骤复杂所带来的假阳性的污染风险。

 ICR Swab 环境监测预制培养基