端午佳节临近，是不是已经迫不及待想要收起白大褂，开启休假模式啦？
别急！端午前的最后一课，是重点！今天，默克微生物检测要和大家聊聊的是环境监测培养基采样后的预储存条件对试验计数结果的影响。

在无菌生产的过程中，使用沉降碟和接触碟进行环境监测是十分重要的。通常，采样是在洁净间进行，然后转移到实验室进行培养和结果计数。但由于在生产过程中，采集的样品有时并不能保证可以立即转移到培养区域培养，在培养开始前，样本有时需要先在室温或者冰箱中保存，这势必会对微生物的生长及计数结果产生影响。
因此，为研究不同的预储存条件对微生物的生长及计数结果的影响，我们在试验表面上进行现场表面取样，选择含4种中和剂的胰酪大豆胨琼脂培养基 (TSA) 作为检测培养基，开展了专业的实验调查。

培养基的预储存条件
根据不同的实验室规范要求，对培养基的预储存条件具体如下：
1. 培养基经表面采样或接种后，于30°C - 35°C直接培养。
2. 培养基经表面采样或接种后，先于室温保存16 -18h，再于30°C - 35°C培养。
3. 培养基经表面采样或接种后，先于4°C - 8°C保存2h，再于30°C - 35°C培养。
4. 培养基经表面采样或接种后，先于4°C - 8°C保存6h，再于30°C -35°C培养。
5. 培养基经表面采样或接种后，先于4°C - 8°C保存16-18h，再于30°C -35°C培养。
6. 培养基接种后，先于4°C - 8°C保存>55h，再于30°C-35°C培养。

确定了培养基的预储存条件，具体的实验方法是如何的呢？跟上小编的脚步，我们正式发车啦！

方法和结果
第一部分：预储存条件对试验微生物生长的影响
试验菌株选取洁净室中较常见的微生物，且与人体表皮相关的微生物，参考美国和欧洲药典中胰酪大豆胨琼脂培养基促生长测试建议的试验菌为代表。

选取的试验菌株和培养条件，以及在采样后采取的保存条件，如表1所示。


将试验菌的新鲜培养物，稀释到约10-120CFU，接种到检测培养基平板上。每种试验条件进行两次独立实验，每次实验重复5次。对4°C - 8°C保存>55h的预储存条件只进行了一次实验。回收率根据与未经预储存平板的菌落平均数作比值计算。
*回收率=经预储存再培养的菌落数×100 /直接培养的菌落数

两次独立实验的回收率都表现出了相同趋势，需氧试验菌株的结果如图1所示。



另外，痤疮丙.酸杆菌进行了厌氧和需氧两种预储存条件的实验。该试验菌株的结果如图2所示。


第二部分：现场表面取样
在实验室环境使用胰酪大豆胨琼脂培养基（含卵磷脂、聚山梨酯80、组氨酸和硫代硫酸钠）的接触碟采集20行（每行5点）的表面样本。取样方式如表2所示。经表面采样后，这些平板先按预储存条件保存，再于30℃-35℃培养3天。最后计算菌落数并比较每种预储存条件。各种预储存条件如下所列：
• 培养基经表面采样后，于30°C - 35°C直接培养。
• 培养基经表面采样后，先于室温保存16 -18h，再于30°C - 35°C培养。
• 培养基经表面采样后，先于4° C - 8°C保存2h，再于30°C - 35°C培养。
• 培养基经表面采样后，先于4° C - 8°C保存6h，再于30°C -35°C培养。
• 培养基经表面采样后，先于4° C - 8°C 保存16-18h，再于30°C -35°C培养。



结果如图3所示。在大多数的预储存条件下，试验样本的菌落平均数集中在10或11CFU。16-18h较长的低温预储存条件造成了菌落平均数在6 CFU的较低回收率。图3显示了在每个预储存条件下的所有测试结果。低温的保存条件有可能会降低一些微生物的回收率，不利于微生物的培养生长。



看到这里，您看出结论了吗？

概要和结论

1. 此次研究表明在常规培养前进行不同条件的预储存，对金黃色葡萄球菌、嗜根考克氏菌、表皮葡萄球菌、痤疮丙.酸杆菌、纹带棒状杆菌、大肠埃希菌和普通青霉菌的回收率并无影响。所有试验菌株的回收率都在70%到200%。

2. 在室温保存不超过18h或在低温保存不超过6h，对样本的促生长性能没有影响。在培养前低温保存超过6h，样本的回收率会略微下降。在取样后和常规培养前，室温保存是最佳选择，因为该温度支持多种微生物生长。

3. 另一方面，如果在室温下过长时间存放，会有霉菌过度生长的风险。

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同时，默克的环境监测预制平板适合与MAS-100 NT微生物空气采样器配套使用，我们已按照ISO 14698要求进行验证，在物理和生物效率测试中，显示可靠的结果。

知道大家迫不及待要过节了，那么今天的课程就到这里结束啦! 近期疫情虽有反弹现象，但相信在所有人的共同努力和积极防控下，我们一定能够战胜疫情的。
大家端午快乐！下课！