为了获得一个漂亮的 western blot 结果，大家也是蛮拼的。一抗、二抗、封闭、显色，各种优化。唯独转印膜，大家好像不太在意。一般都是实验室里有什么，我就用什么。NC、PVDF，照单全收。殊不知，这小小的一块膜也与最终的结果息息相关。如何选择最合适的转印膜，颇尔实验室来给你支两招，颇尔公司可以提供全球最多最全的转印膜类型，也是全球首家尼龙膜用于 Southern 和 Northern。


NC 膜 vs. PVDF 膜

硝酸纤维素（NC）膜和聚偏二氟乙 xi（PVDF）膜是 western blot 中最常用的两种膜。NC 膜是最早用于 western blot 的膜，它的优点在于容易被乙醇溶液润湿，同时产生不错的结果。PVDF 膜在 1985 年被开发出来，在严苛条件下表现出更高的蛋白保留，比如有机溶剂存在时，或者在酸性或碱性条件下。



与 NC 膜相比，PVDF 膜有着更高的机械强度和出色的化学稳定性，因此适合多次剥离（stripping）和反复检测（reprobing）。同时，PVDF 膜也有着更高的结合能力。NC 膜的典型结合能力是 80 μg/cm²，而 PVDF 膜达到 150 - 160 μg/cm²，这意味它的灵敏度更高。由于 PVDF 膜的疏水性，它成为疏水蛋白质（如膜蛋白）的选择。也正因为如此，PVDF 膜在使用前需要一个简短的甲醇润湿步骤。

PVDF 膜也有讲究

看到这里，也许你准备打电话订购 PVDF 膜了吧，别急，这里面的学问还不少。同样是 PVDF 膜，它们的性质也有不同。以颇尔实验室的FluoroTrans家族为例，尽管这些 PVDF 膜都具有高的蛋白结合能力，但它们有着不同的侧重点。

FluoroTrans PVDF 膜是为 N 端蛋白测序而优化的，具有高的吸附能力，高的蛋白保留能力以及对于化学溶剂的抗性。它的孔径约为 0.2 µm。固定在FluoroTrans膜上的蛋白不容易被去除，即使是用强烈的离液盐。此外，它的荧光背景极低，适合荧光免疫检测。

若是开展 western blot，FluoroTrans W PVDF 膜则是不二之选。它有着极高的灵敏度、出色的分辨率，在所有检测系统中都表现出非常低的背景水平。此外，它用结合能力和保留能力上的一点点牺牲，换取了转移过程中极低的蛋白穿透。这种膜的通用性也很好，对 10 kD 的小蛋白和> 100 kD 的大蛋白都适用。因此，你不需要在实验室里准备 0.2 µm和 0.45 µm两种孔径的膜，只要这一种 0.2 µm的膜就够了。颇尔实验室有 PVDF 膜的优化指南和 Trouble shooting 常见问题分析和解决方案，欢迎索取。


各种包装

转印膜通常以各种包装形式提供，比如FluoroTrans W PVDF 膜，颇尔实验室就提供了一大卷的膜和各种预切膜。相比之下，一大卷（26 cm x 3.3 m）当然更经济实惠，用多少切多少，不过要麻烦一点。各种大小的预切膜（7 x 9 cm、10 x 15 cm 或 20 x 20 cm）则省时省力，只是不太省钱。我们还是建议科学家们选择大卷的膜来订购，更加经济实惠。

使用小贴士

BSA 通常作为 NC 膜的封闭液，但是对于 PVDF 膜，它的封闭效果有时并不好。因此，颇尔实验室建议，在封闭 PVDF 膜时可以尝试选用 0.5% 的酪蛋白（Casein）。具体操作如下：将酪蛋白加入缓冲液中，然后在加热板上加热至 80℃ 或直到溶解；不要煮沸溶液。在使用前冷却至 25 - 40℃。

另外，不要让膜在检测过程中的任何时间点干透，如果膜部分变干，可以让膜完全干掉，然后用甲醇重新润湿，之后用缓冲液浸泡，继续操作。如果你对 PVDF 膜或 western blot 过程还有其他问题，欢迎咨询颇尔实验室，我们为您准备了颇尔转印膜手册，里面有非常详实的实验流程和注意事项，欢迎各位老师索取使用。