用Q Exactive高分辨质谱定量血清中胰岛素

胰岛素是人体内调控血糖稳态最重要的激素之一，从上世纪80 年代开始，各制药公司开始生产各种胰岛素类似物，以满足不 同的药代动力学需求，例如速效胰岛素类似物门冬胰岛素（insulin aspart）和长效胰岛素类似物甘精胰岛素(insulin glargine) 等。对于血清胰岛素的定量以往主要采用免疫法，但采用免疫 法检测胰岛素也存在着以下不足。第一，目前各厂家商业化的 免疫试剂盒并未向国际标准物质进行溯源，导致各厂家检测的 同一样本可能存在两倍的偏差[1]。第二，病人血清中自抗体和 异嗜性抗体的存在也会干扰免疫法的定量结果。第三，由于胰 岛素类似物药物和內源胰岛素的序列高度相似，不同厂家的免 疫试剂盒对于胰岛素类似物的区分能力各不相同，极大的影响 了血清中內源胰岛素和胰岛素治疗类似物的定量。 

目前，基于质谱的临床检测方法已经被越来越多的医院检验科 和临床实验室所追捧。质谱法有出色的灵敏度，特异性和稳定 性，在一些领域中，例如新生儿代谢性疾病的筛查，维生素D 的检测等，已成为了首选的检测方法。基于质谱的检测方法目 前主要依赖三重四级杆质谱仪进行选择反应监控（selected reaction monitoring, SRM）的扫描方式，这种扫描方式对于绝大 多数小分子化合物，肽段和蛋白质都获得了良好的检测效果。 而胰岛素由于存在3个稳定二硫键，碎片离子少，所以采用选择 反应监控来分析完整胰岛素变得尤为困难。实际上，美国的大 型独立第三方医学实验室Quest在用质谱分析胰岛素时，需要用 还原剂打开胰岛素的二硫键，通过分析胰岛素的B链来代替完 整胰岛素[2]。在这篇文章中，我们利用Orbitrap超高分辨质谱得 到高精度的一级质谱信息来分析完整胰岛素，从而绕开胰岛素 不容易产生碎片离子的问题。此外，对于胰岛素这一类大肽段类分析物，合适的色谱分析条件也尤为重要，我们使用ProSwift  RP-4H整体柱获得了极佳的分析效果。