为方便实验操作,可以采用原蛋白保存溶液,必须不含有氨基小分子。一般采用PBS或者MES。
NaN3虽然会对抗体跟磁珠的结合形成竞争。一般情况下,小于0.05%NaN3的可以忽略不计。如果NaN3含量多,可以采用透析的方法去除。
IgG建议使用PBS缓冲液配制。若含有其他伯氨基成分,需透析或超滤去除,避免与磁珠竞争反应。
Mag NHS的IgG偶联量为30μg/mg磁珠。取1mg磁珠作为反应量时,加入IgG的量常为50μg左右。配制IgG溶液的体积越少越好,但要保证磁珠能够分散。
a.需确保配体保存体系中不含其他伯氨基成分(例如Tris、BSA、明胶等),如有,需透析或超滤去除。
b.偶联蛋白一般使用 0.1-3.0 mg/mL 的蛋白溶液,浓度越高偶联效率越高。