首先，尝试在NY/T原方法下，使用多元胺键合的CAPCELL PAK NH2色谱柱，对用户提供的质控样品进行分析。

由于等度条件不能将样品中所有基质洗脱，会导致连续进样保留时间不稳定以及基线抬升的问题，因此，在原条件的12.5 min后添加梯度条件来增加洗脱能力，以消除样品基质残留带来的影响。

在此条件下分析样品加标溶液结果如图1所示，灭蝇胺保留时间在10 min左右，但其出峰位置有较大的基质干扰，与其相邻杂质未得到良好分离，与用户反映情况一致。尝试对流动相中有机相比例进行微调，但都对分离效果改善不大。

图1 CAPCELL PAK NH2色谱柱分析色谱图

HPLC Conditions ：

色谱柱：CAPCELL PAK NH2 UG80 S5; 4.6×250

流动相：A：水 ；B：乙腈

流动相：B% 97%(0 min)-97%(12.5 min)-50%(12.6 min)-50%(18 min)-97%(18.1 min)-97%(25 min)

流动速：1.0 mL/min

柱动温：35 ℃

进样量：10 μL

浓动度：用户提供

检动测：PDA 215 nm

接下来，使用另一款氨丙基键合的DAISOPAK SP-120-5-APS-P色谱柱，参考NY/T方法，对用户提供的样品加标溶液进行分析。DP SP-APS-P对灭蝇胺保留相较CP NH2更强，为消除基质残留影响，在25 min后添加梯度条件来增强洗脱。

结果如图2所示，灭蝇胺保留时间19.58 min，样品加标溶液分析中灭蝇胺峰与其相邻杂质分离度1.702，可达到基线分离，且重复性良好

图2 SP-APS-P色谱柱分析色谱图

HPLC Conditions ：

色谱柱：DAISOPAK SP-120-5-APS-P; 4.6×250

流动相：A：水; B：乙腈

流动相相B% 97%(0 min)-97%(25 min)-50%(25.1 min)-50%(30 min)-97%(30.1 min)-97%(40 min)

流动速：1.0 mL/min

柱动温：35 ℃

进样量：10 μL

浓动度：用户提供

检动测：PDA 215 nm

也尝试通过调节流动相中初始有机相比例来缩短整体保留，结果如图3所示，加标样品分析结果中灭蝇胺峰与其相邻杂质有重合趋势，无法得到良好分离结果。

图3 SP-APS-P调节梯度条件后

HPLC Conditions ：

色谱柱：DAISOPAK SP-120-5-APS-P; 4.6 ×250

流动相：A：水 ; B：乙腈

流动相：B% 95%(0 min)-95%(15 min)-50%(15.1 min)-50%(20 min)-95%(20.1 min)-95%(30 min)

流动速：1.0 mL/min

柱动温：35 ℃

进样量：10 μL

浓动度：用户提供

检动测：PDA 215 nm

结    论

综上，在《NY/T 1725-2009蔬菜中灭蝇胺残留量的测定-高效液相色谱法》原条件下，分析灭蝇胺样品存在样品残留导致保留不稳的情况，可通过在分析方法中加入部分梯度条件，增加流动相洗脱能力来解决。

使用DAISOPAK SP-120-5-APS-P色谱柱，在原条件25 min后增加梯度条件的情况下，可得到灭蝇胺加标样品溶液的良好分析结果，且重现性良好。但由于流动相中初始条件下水相及有机相比例相差较大，不同仪器之间保留及分离可能略有差异。

NY/T 1725-2009蔬菜中灭蝇胺残留量

的测定-高效液相色谱法

推荐用柱

DP958371 DP SP-120-5-APS-P

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