宸安科普:染色后冻存3个月,流式质谱的样本依旧稳定!
01
实验概览
“流式样本染色之后可以存放多久?”这是很多老师会问我们的一个问题。
在流式检测中,常会出现因样本规划、运输延迟、机时不足等原因造成已染色的新鲜样本无法及时上机检测的情况,这便要求抗体与样本在结合后有足够的稳定性。在此前的测试中,样本在由宸安生物的CytoATLAS® Antibody流式质谱抗体进行染色后,可于4℃的环境下稳定保存7天。
而本次实验,我们则着重探究对已染色的PBMC样本进行长时间冻存的可行性,在-80℃的条件下将已染色的样本放置90天(3个月)。
02
实验结果
如下图所示,即使经过长达90天的冻存,样本依旧十分稳定,其分群并未因极端温度或长期放置而产生显著变化:
不仅是细胞表面的标志物,胞内的细胞因子(TNFα、IFNγ、Granzyme B)也保持了与第0天极度接近的检测水平:
由此可见,CytoATLAS® Antibody流式质谱抗体及其配套辅助试剂在-80℃长期冻存后仍拥有优异的使用稳定性。这项优势能为流式质谱技术的使用者提供便利,帮助他们应对更多的科研和临床应用场景。
03
实验设计
回顾:流式质谱样本制备
| 染色:根据实验方案,将抗体试剂加入到外周血全血样本中,室温孵育15分钟
| 红细胞裂解:加入溶血素,涡旋混匀后室温孵育10分钟
| 清洗:室温下离心5分钟,弃上清,再加入细胞染色液重悬样本,室温下离心5分钟,弃上清
| 嵌入剂Ir染色:将Ir-DNA嵌合试剂加入到细胞固定剂中,涡旋混匀后加入到样本中,室温孵育10分钟
| 冻存:将已染色的样本平均分为2份,其中1份进行上机测试,另1份置于-80℃的冰箱冻存90天再取出测试
| 清洗:加入细胞染色液重悬样本,室温下离心5分钟,弃上清,重复2次
| 上样:加入上样溶液重悬样本,室温下离心5分钟,弃上清,再次加入上样溶液,准备上机分析
抗体信息
1
IgD - 145Nd
2
CD27 - 146Nd
3
HLA-DR -1 51Eu
4
CD8 - 152Sm
5
CD45RA - 153Eu
6
CD123/IL-3R - 154Sm
7
CD19 - 160Gd
8
CD14 - 164Dy
9
CD66b - 165Ho
10
CD197/CCR7 - 167Er
11
CD4 - 168Er
12
CD45 - 171Yb
13
TCRγδ - 174Yb
14
CD3 - 209Bi
15
Granzyme B - 172Yb
16
IFN-γ - 173Yb
17
TNFa - 176Yb
18
DNA1 – 191Ir
19
DNA2 – 193Ir
20
Live/Dead – 198Pt
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