　　雷公藤红素Celastrol(Tripterine；Tripterin)以浓度依赖性方式显著抑制PC-3细胞中蛋白酶体胰凝乳蛋白酶的活性；在2.5μM时，它达到约55%的抑制，与其对纯化的20S蛋白酶体的效力相当(IC50=2.5μM)。此外，观察到IκB-α、Bax和p27水平升高，这是用雷公藤红素Celastrol处理的PC-3细胞中蛋白酶体的三种众所周知的靶蛋白。

　　体内研究

　　用雷公藤红素 Celastrol(1-3 mg/kg/d，腹腔注射，1-31天)处理携带PC-3肿瘤的裸鼠导致显著抑制肿瘤生长(65-93%)。

　　用3和6 mg/kg 雷公藤红素 Celastrol处理后，丙二醛(MDA)水平分别显著降低35.2%和36.7%(P<0.05)。用3和6 mg/kg的Celastrol处理可显著将GSH水平(P<0.05)恢复到几乎正常的水平。

　　Celastrol雷公藤红素的实验参考方法

　　激酶分析

　　将纯化的兔20S蛋白酶体（0.1μg）与各种荧光肽基质（40μM）在100μL的测定缓冲液中（20 mM Tris-HCl，pH 7.5），在Celastrol或Oridonin的不同浓度下或在DMSO溶剂中孵育2小时，37°C后，测量每个蛋白酶体活性的抑制率。

　　细胞测定

　　前列腺癌细胞（5,000-8,000）被接种在96孔板的每个孔中，然后用DMSO、雷公藤红素Celastrol或Oridonin处理12到16小时，于不同浓度下，随后再额外加入Z-Gly-Gly-Leu-AMC（40μM）孵育2小时。之后，使用整个板来测量蛋白酶体的活性。

　　动物给药

　　小鼠

　　使用年龄为5周的雄性裸鼠(NCRNU-M)，该裸鼠具有免疫缺陷。在第0天，将人前列腺癌PC-3或C4-2B细胞(5-10×106)悬浮于0.1 mL无血清RPMI 1640中，注射到每只鼠右侧腹部皮下（每组四只小鼠）。在使用PC-3细胞的第一个实验中，接种后的第14天，动物开始每天腹腔内注射50至100μL的处理剂（包含10% DMSO、70% Cremophor/乙醇（3:1）和20% PBS），以及1.0或3.0 mg/kg的Celastrol。使用卡尺每天测量肿瘤大小，并使用标准公式计算体积：宽度的平方乘以长度除以2。每周测量体重。为了研究是否在实验的早期阶段抑制了蛋白酶体，在治疗3天后，牺牲一只对照小鼠和一只接受3.0 mg/kg Celastrol处理的小鼠。其余小鼠在接受16天的治疗后牺牲，此时对照组肿瘤达到1,400 mm3。在第二个PC-3肿瘤实验中，接种后的12天，小鼠随机分为三组，并分别接受对照、Celastrol或Oridonin每日1.5 mg/kg的处理，持续31天。在另一个实验中，为了研究Celastrol对AR表达的影响，携带C4-2B肿瘤的裸鼠每天腹腔内注射处理剂或3.0 mg/kg Celastrol雷公藤红素。

　　大鼠

　　雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠（n = 90，6周龄），体重161±9克，随机分为对照组（NC）和高能量饮食组（HED）。在对照组中，动物接受标准饲料，而HED组的大鼠则额外摄入高能量乳剂。在各自饮食后的8周，将溶解在0.1mol / l柠檬酸缓冲液（pH 4.5）中的链脲佐菌素（STZ; 45 mg / kg）注射到HED组的大鼠尾静脉中，以建立T2DM模型，而对照组的大鼠则注射柠檬酸钠缓冲液。注射STZ后7天血糖水平≥16.7 mM的大鼠被选作糖尿病模型。平均来说，80％的接受STZ注射的大鼠符合这些标准。在成功诱导糖尿病后的1周，随机将大鼠分为糖尿病模型（DM）组、低剂量Celastrol组（1 mg/kg/day）、中剂量Celastrol组（3 mg/kg/day）和高剂量Celastrol组（6 mg/kg/day）（每组15只大鼠）。治疗组的大鼠通过灌胃给予Celastrol，而NC和DM组的大鼠则给予相同数量的蒸馏水（2 mL）。在各自治疗8周后，大鼠经过腹腔注射戊巴比妥钠（30 mg/kg体重）麻醉，采集组织样本进行分析。将脊柱旁肌切下，并沿纵轴垂直切割，在磷酸缓冲20％甲醛中固定。然后制备石蜡包埋切片（5μm）进行H&E染色。脊柱旁肌的切片被迅速冷冻在液氮中，并存放在-80℃直到进一步分析。

　　MCE未经独立确认这些方法的准确性，以上仅供参考。