本试剂盒是采用猪O型口蹄疫病毒VP1基因工程表达产物包被微孔板，在试验中，加入稀释的对照血清和待检血清，经温育后，若样品中含有猪口蹄疫病毒VP1的特异性抗体，则将与检测板上抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标二抗，与检测板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶结合物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，加入HF溶液终止反应后，用酶标仪630nm波长测定各反应孔中的OD值。 【作用与用途】 用于检测猪血清中口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC的抗体。用于区别口蹄疫野毒感染猪和用灭活疫苗免疫猪。 【主要成分与含量】 1 包被抗原的微孔板 2块 （96孔） 2 阴、阳性对照血清 各1管 （1ml/管） 3 羊抗猪酶标二抗 1瓶 （20ml/瓶） 4 20倍浓缩洗涤液 1瓶 （30ml/瓶） 5 底物A液、B液 各1瓶 （10ml/瓶） 6 终止液 1瓶 （10ml/瓶） 7 样品稀释液 2瓶 （50ml/瓶） 8 血清稀释板 2块 （96孔/板） 9 说明书 一张 【样品制备】 取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。 【洗涤液配制】 使用前，浓缩的洗涤液应恢复至室温（25℃左右）,并摇动使沉淀的盐溶解（最好在37℃水中加热5-10min），然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释（例如：用20 ml浓缩液加上380ml水），稀释好的洗涤液在4℃可以存放7天。 【样品稀释】 待检血清1：40稀释：具体为在血清稀释板中按1：40稀释待检血清（195μl样品稀释液中加5μl待检血清，混匀即可）。 注意：阳性对照和阴性对照1：4稀释（180μl样品稀释液中加60μl对照血清）。 【注意事项】 1 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，使用后放回2-7℃。 2 不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。 3 不要用口移液。 4 TMB（底物液B）不要暴露于强光和避免接触氧化剂，底物液A、底物液B、终止液不许使用移液器。 5 微孔板拆封后避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中，应尽快置于4℃)。 6 待检血清样品数量较多时，应先使用血清稀释板稀释完所有要检测血清，再将稀释好的血清转移到检测板，使反应时间一致。 7 浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释，如果发现有结晶加热使其溶解后再使用。 8 严格按照操作说明书可以获得最好的结果，操作过程中移液，定时和洗涤等的全过程必须精确。 【用法与判定】 1 取检测板（根据样品多少可拆开分次使用），用稀释好的洗涤液洗板2次（200µl/孔）静置2分钟后在干净吸水纸上拍干。 2 取稀释好的待检样品100μl加入到检测板中；阴性对照和阳性对照各设2孔，每孔100μl；轻轻振匀孔中样品（勿溢出），置37℃温育30分钟。 3 甩掉板孔中的溶液，用洗涤液洗板3次，200μl/孔，每次静置3分钟倒掉，再在干净吸水纸上拍干。 4 每孔加酶标二抗（抗猪IgG-HRP结合物）100μl，置37℃温育30分钟。 5 洗涤5次, 方法同2。切记每次在干净吸水纸上拍干。 6 每孔先加底物液A一滴（50µl）、再加底物液B一滴（50µl），混匀，室温(18℃-25℃)避光显色10分钟。 7 每孔加终止液1滴(50μl)，10分钟内测定结果（检测前在震荡器上轻轻震动一下）。 8 判定 在酶标仪上测各孔的OD630nm值。试验成立的条件是阳性对照孔的OD630nm值均≥0.8阴性对照孔的平均OD630nm值均＜0.3。 样品OD630nm值≥0.4时判为阳性；样品OD630nm值＜0.4时判为阴性。 注意：用620 ~650纳米波长测定结果均有效。 间接血凝试验（HIA）和酶联免疫吸附试验（ELISA）结果对比分析 间接血凝试验（HIA） 小于1：128 1：128～1：256 1：512～1：2048 大于1：2048 酶联免疫吸附试验（ELISA） 小于0.40 0.40～0.70 0.70～1.20 大于1.20 注：以上结果仅供参考。 【贮存】 2-8℃避光保存 【有效期】6个月