2×HYKGCBuffer(with4mMMgSO4)
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概述 2×HYK GC Buffer(with 4mM MgSO4)是使用Long Taq DNA Polymerase扩增具有复杂的二级结构模板(例如GC Rich、重复序列等
概述
2×HYK GC Buffer(with 4mM MgSO4)是使用Long Taq DNA Polymerase扩增具有复杂的二级结构模板(例如GC Rich、重复序列等)时的推荐PCR反应Buffer;该产品与华因康 Long Taq DNA Polymerase(EN1011S/EN1011L)中附带的2×HYK GC Buffer(with 4mM MgSO4)完全相同。
保存
-20℃低温保存。
产品应用
配合HYK Long Taq DNA Polymerase(EN1011S/EN1011L)扩增具有复杂的二级结构模板(例如GC Rich、重复序列等)。
注意事项
- 使用2×HYK GC Buffer(with 4mM MgSO4)进行PCR扩增时,建议使用Tm值较高的引物。
- 在常规PCR Buffer扩增失败情况下,使用本公司的2×HYK GC Buffer(with 4mM MgSO4),成功扩增2031bp的GC含量在70%的DN**段。
- PCR的反应体系请在冰上配制,然后置于预热至变性温度下的PCR反应仪上进行PCR反应,可增强PCR扩增的特异性。
- 由于2×HYK GC Buffer和一般的PCR用Buffer相比DNA变性效果较强,因此简单的DNA 模板使用2×HYK GC Buffer(with 4mM MgSO4)进行PCR扩增时,有时会降低PCR的扩增效率,此时推荐用常规的PCR Buffer。
应用实例
以Thermus thermophilus菌液为模板扩增DN**段(2031bp、GC含量70%)。
1. 反应体系如下:
组分 | 用量 |
Thermus thermophilus菌液 | 0.3μl |
Forward Primer | 10pmol |
Reverse Primer | 10pmol |
dNTP(10mM each) | 1μl |
2×HYK GC Buffer | 25μl |
Long Taq DNA Polymerase(5U/μl)(EN1011) | 0.25μl |
ddH2O | Up to 50μl |
2. PCR反应条件:
温度 | 时间 | 循环数 |
94℃ | 7min | 1 |
94℃ | 30s | 30 |
58℃ | 30s | |
72℃ | 2min | |
72℃ | 10min | 1 |
4℃ | ∞ | 1 |
3. 结果: