苏丹红检测试剂盒

1. 概述：苏丹红ELISA检测方法适于食品种的定量或定性检测，可检测番茄汁、番茄酱、辣酱汁、辣椒酱，辣椒粉，萃取和稀释程序请参看技术公告。检测结果需要HPLC，GC/MS或其他方法确证。 2. 安全说明试剂盒中的标准溶液含有少量的苏丹红。此外，底物溶液中含有四甲基邻苯二胺，终止液中含有盐酸。应避免皮肤和粘膜接触终止液。如果此类试剂接触到皮肤，应用水冲洗。 3.保存和稳定性苏丹红ELISA试剂盒需冷藏（4-8℃）。所有试剂在使用前应该平衡到室温（20-25℃）。试剂可以使用至有效期。 4. 检测原理本试剂盒基于抗体识别苏丹红的原理。苏丹红HRP标记物与标样及样品提取液中的苏丹红竞争与溶液中的兔抗苏丹红抗体结合。苏丹红抗体与包被板上的二抗结合。经洗涤步骤后加入底物，显色（蓝色）。经20min孵育，反应被终止，颜色变为黄色，读取各孔OD值。比较未知样品的颜色和标样的颜色，就可得出样品中的苏丹红浓度。用每个标准样品点绘制出标准曲线，样品浓度在标准曲线内查出。 5.本试剂盒的局限和可能产生的干扰经测试食品样品如番茄汁、番茄酱、辣酱汁、辣椒酱，辣椒粉，经稀释缓冲液稀释起到很好的去除基质反应的效果，大多数样品中的有机和无机物经测试对本反应没有影响。然而，由于样品成份的多样性，不能完全避免矩阵反应的干扰。一些其他的食品有可能需要不同的稀释，并需要确认有效性。误错误的操作可能导致错误，如：试剂盒缺乏必要的储存条件，错误的加液顺序或加液量，底物孵育时间过长或过短，在测试过程中反应温度超出范围（低于10℃或高于30℃）。苏丹红ELISA试剂盒提供了初筛的结果，同其他方法（GC，HPLC等）一样，结果需经其他方法确证。 A提供的试剂及材料 1． 用铝箔袋真空包装的96孔板(Microtiter plate) （12×8条），包被二抗（抗兔），内含指示干燥剂。 2． 浓度分别为 0，0.25，0.50，1.0，3.5，5.0ng/ml(ppb) 的6瓶苏丹红标准液(Calibrator/Standard)。 3． 1 瓶6mL 苏丹红HRP酶标记物. （Sudan Red-HRP Conjugate） 4． 苏丹红抗体溶液 （Anti- Sudan Red Antibody solution）6ml 5． 1 瓶 12 mL 底物(Substrate). 6． 1 瓶 6 mL 终止液(STOP SOLUTION). (小心操作) 7． 5×浓缩洗液Wash Solution，用去离子水或蒸馏水稀释5倍。 8． 样品稀释液Sample Diluent 30ml B试验准备微量加样器和加样头对于移取样品和标准品是必须的，推荐使用多道移液器加酶结合物。加入底物和终止液的顺序要一致。在一次试验中使用一个批次的试剂，在装配试剂时可能会有相应的调整。 1. 将所有试剂及样品置于室温。 2. 从铝箔袋中取出相应数量的微孔条，放入干燥剂并重新封好袋子，放入冰箱（4-8℃）。 3. 标准品、酶结合物、抗体、底物和终止液无需稀释，直接使用。 4. 洗液以1:5稀释。如果使用整瓶（100ml），使用400ml去离子水或蒸馏水稀释。 5. 操作终止液要小心，因为内含硫酸溶液。 C检测步骤 1. 按加样单顺序，吸取50ul标样或稀释的样品提取液到相应的微孔。推荐双孔或三孔测试。 2. 使用单道或多道移液器，每孔加50ul苏丹红HRP酶标记物。 3. 使用单道或多道移液器，每孔加50ul苏丹红抗体溶液。 4. 用封口膜封板，扶着板架上方作圆周运动，轻轻混合30秒（避免溅出液体），孵育45分钟。 5. 用洗液洗板四次，每次每孔加入250洗液，将孔中的液体在吸水纸上拍干。 6. 每孔加入100ul底物溶液，避光孵育20分钟。 7. 每孔按加底物的顺序加入50ul终止液。 8. 加入终止液后 9. 15min内，用酶标仪读取450nm下的吸光值。 D 结果评估www.5117dxy.com 本试剂盒用商品化ELISA评估软件(4个参数或Logit/Log)进行评估。进行手动评估时，先计算出每个标样的平均OD值。用每个标样的平均OD值除以0标样的平均OD值，得到每个标样的％B/B0值。以每个标样的％B/B0为纵坐标，相应的苏丹红浓度对数为横坐标构建标准曲线。根据样品的％B/Bo，就可用标准曲线计算出样品中苏丹红的浓度。苏丹红浓度小于标样1 (0.25ng/mL或ppb)的样品报告<20ppb。浓度高于标样5(5 ng/mL)的样品必须进一步稀释以获得更准确的结果。半定量的结果可以通过比较样品和标样的OD值得到，样品颜色比标样颜色浅说明样品中的苏丹红含量高于标准品浓度，样品颜色比标样颜色深说明样品中的苏丹红含量低于标准品浓度。 E. 未提供的材料 1. 微量移液器和一次性塑料吸头(50-200) 2. 多道移液器或连续移液器及吸头(50-250 ul) 3. 洗板机(可选择) 4. 酶标仪(波长450 nm) 5. 微量振荡器(可选择) 6.蒸馏水或去离子水 7.甲醇 8.吸水毛巾或其它吸水材料 9.计时器 F工作表微孔板包括12个8孔条，可以分别使用。每次检测均要测试所有的标准样品，不可以使用以前测试过的标准样品值。 注：图片及文字介绍仅供参考，请以实物为准