二代M-MLV逆转录单酶，EnzymoPure™

中文名：二代M-MLV逆转录单酶

英文名：M-MLV RNase H- Reverse Transcriptase

纯度：EnzymoPure™

货号：M346745

存储温度：-20°C储存

产品介绍：

产品组成

产品简介

M-MLV RNase H- Reverse Transcriptase 是通过基因修饰 和重组技术克隆表达的 RNase H 活性缺失型莫洛尼氏鼠白血病毒 （Moloney Murine Leukemia Virus, M-MLV）逆转录酶。经过基因 工程改造，本酶的最适反应温度提升至 42℃，延伸能力更强，可用于 较长的 cDNA 合成。

活性定义

37℃条件下，以 Poly(A)-Oligo(dT) 为模板 / 引物，在 10 min 内， 掺入 1 nmol 的 [ 3 H] dTTP 所需要的酶量定义为 1 个活性单位（U）。

使用方法

第一链 cDNA 合成步骤

1. 于冰上配制如下反应体系：

a. 推荐使用试剂盒提取的已去除基因组DNA 污染的高质量 RNA 作为模板。

2. 将以上混合液在 65℃温育 5 min，迅速取出置于冰上冷却 1 min；

3. 向反应混合液中继续加入：

4. 轻柔吸打混匀后，瞬离；

5. 若使用 Oligo(dT)20 或基因特异性引物，42℃温育 30 min；若使用随机引物，先 25℃温育 5 min，之后 42℃温育 30 min；

6. 反应结束后，85℃温育 5 min 以终止反应；

7. 将获得的 cDNA 溶液置于冰上，用于后续实验。

注：cDNA 溶液置于 -20℃可保存半年；置于 -80℃可长期储存。

质量控制

宿主原性DNA检测：无宿主 DNA 污染

核酸内切酶残留检测：将酶液与超螺旋质粒 DNA 在 37℃温育 4 h，通过 DNA 电泳检测质粒无变化。

核酸外切酶残留检测：将酶液与双链 DNA 底物在 37℃温育 16 h，通过 DNA 电泳检测双链DNA底物无变化。