三代M-MLV逆转录单酶，EnzymoPure™

中文名：三代M-MLV逆转录单酶

英文名：M-MLV GIII Reverse Transcriptase

纯度：EnzymoPure™

货号：M347674

存储温度：-20°C储存

产品介绍：

产品组成

产品简介

M-MLV GIII Reverse Transcriptase 是通过基因修饰和重组技术 获得的第三代 M-MLV 逆转录酶。该酶相对于野生型 M-MLV 逆转录 酶去除了 RNase H 活性，并大幅提高了热稳定性（最适反应温度为 50℃），从而大大提高了合成第一链 cDNA 时的特异性和长度（最长 可达 12 kb），增强了对 RNA 复杂二级结构的耐受性。

酶活单位定义

37℃条件下，以 Poly(A)-Oligo(dT) 为模板 / 引物，在 10 min 内， 掺入 1 nmol 的 [ 3 H] dTTP 所需要的酶量定义为 1 个活性单位（U）。

质量控制 宿主原性DNA检测 无宿主 DNA 污染。 核酸内切酶残留检测 将酶液与超螺旋质粒 DNA 在 37℃温育 4 h，通过 DNA 电泳检测 质粒无变化。核酸外切酶残留检测 将酶液与双链 DNA 底物在 37℃温育 16 h，通过 DNA 电泳检测 双链 DNA 底物无变化。

使用方法

质粒载体线性化与去磷酸化同步反应流程 1. 于冰上配制如下反应体系： 

a. 推荐使用试剂盒提取的已去除基因组 DNA 污染的高质量 RNA 作为模板。

2. 轻柔吸打混匀后，瞬离；

3. 若使用 Oligo(dT)20 或基因特异性引物，50℃温育 30 min；若使用随机引物，先 25℃温育 5 min，之后 50℃温育 30 min； 注：若目的 cDNA 小于 3 kb，温育时间可缩短为 15 min。

4. 反应结束后，85℃温育 5 min 以终止反应；

5. 将获得的 cDNA 溶液置于冰上，用于后续实验。 注：cDNA 溶液置于 -20℃可保存半年；置于 -80℃可长期储存。