BCA蛋白定量试剂盒

中文名：BCA蛋白定量试剂盒

英文名：BCA Protein Assay Kit

货号：B665595

存储温度：2-8°C储存

产品介绍：

BCA（Bicinchoninic acid）法是⽬前应⽤⽐较⼴泛的蛋⽩质浓度测定⽅法。基于双缩脲反应，即在碱性环境下蛋⽩质将 Cu2+还原成 Cu+，产⽣⼀种紫蓝⾊复合物，在 562nm 处有⾼的吸光值，该反应产物的量与蛋⽩质浓度成正⽐。BCA 蛋⽩浓度测定法实现了蛋⽩质浓度测定的简便、灵敏、快速和稳定性。试剂盒中提供的蛋⽩标准品为⽤户制作标准曲线提供了便利。该 BCA 蛋⽩浓度测定试剂盒可⽤于⽐⾊⽫法检测，也可⽤于微孔板法检测。前者虽需较⼤量（100μL）的蛋⽩样品，但由于其在检测中使⽤蛋⽩样品与 BCA ⼯作液的⽐率为 1:20（v/v），从⽽降低⼲扰物质带来的影响。后者操作简单⽅便，仅需少量（10-25μL）的蛋⽩样品。不过，由于其在检测中使⽤蛋⽩样品与 BCA ⼯作液的⽐率为 1:8（v/v），某种程度上限制⼲扰物质的承受浓度以及降低最低检测⽔平。 

组分

产品特点

1）灵敏度高，最小检测蛋白量可达 0.2μg，检测浓度下限达到 10μg/mL(在 20~1000μg/ml 浓度范围内有较好的线性关系） 。
2）速度快，比一般的 BCA 蛋白浓度测定试剂盒显色所用时间短。比传统的Lowry 法检测速度约快 4 倍。
3）线性范围广， 20-1000μg/mL 浓度范围内有较好的线性范围。
4) 不受大部分样品中的化学物质的影响, BCA 法测定蛋白浓度的最大优点是蛋白浓度的测定可以耐受高浓度的去垢剂, 可以兼容样品中高达 5%的 SDS; 5%的 Triton X- 100; 5%的 Tween 20, 60, 80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保 EDTA 低于 10mM ，无 EGTA ， 二硫苏糖醇低于 1mM; β-巯基乙醇低于 0.01%。详情见 7 的附表 1。

5) Bradford 法与 BCA 法的对比

操作说明

BCA 工作液配制：

将试剂 A 和试剂 B 按照体积比 50:1 比例混合配成 BCA 工作液。 取 50mL 试剂 A 与 1mL 试剂 B 混合， 配成 51mL BCA 工作液。两者混合时会 有沉淀形成，彻底混匀后沉淀消失。
微孔板测定程序：（工作范围 20-2000 μg/ml）
1. 蛋白标准品配制：室温完全溶解蛋白标准品， 取 20µl 5mg/ml BSA 蛋白标准溶液用 PBS 溶液稀释至 100µl 使其终浓度为 1.0 mg/ml。
2. 按照下表配制 BSA 标准测定溶液：

3. 将适当体积的待测样品加入到微孔板中，并用 PBS 补足到 20 µl
4. 向微孔板中加入 200μL BCA 工作液混匀, 37 ℃放置30 分钟； 注：也可以室温放置 2 小时 ,或 60 ℃放置30 分钟。 BCA 法测定蛋白浓度时, 颜色会随着时间的延长不断加深,并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低, 适合在较高温度孵育,或适当延长孵育时间。
5. 测定 562 nm 处的吸光值， 并记录读数； 以不含 BSA 的样品的光吸收值作为空白对 照。
6. 以 A562 为纵坐标, BSA 含量为横坐标, 绘制标准曲线, 计算样品中的蛋白浓度. 如果蛋白浓度不在标准曲线范围内, 请稀释样品后重新测定。
试管测定程序：（工作范围 20-1000 μg/ml）
1. 蛋白标准品配制：
室温完全溶解蛋白标准品, 取 150µL 5mg/ml BSA 蛋白标准溶液,加入 600μLPBS 溶液稀释至 750µl，使其终浓度为 1.0 mg/ml。
2、按照下表配制 BSA 标准测定溶液：

3. 将适当体积的待测样品加入到试管中， 并用 PBS 补足到 100 µl；
4. 向试管中加入 2ml BCA 工作液，混匀， 37 ℃放置 30 分钟；
5 、6 步骤同上

注意事项

1）BCA 蛋⽩测定法测定时颜⾊会随着时间的延⻓不断加深，显⾊反应的速度和温度有关，需注意保持定时和定温，以确保精确定量。 
2）⻓期保存，若发现 BCA 试剂 A 或者试剂 B 有沉淀发⽣。请 37ºC 温育并伴随搅拌促使其充分溶解。如发现细菌污染，则应丢弃。 
3）实验操作规范，提⾼上样量的精确度。 
4）每次测定都需做相应的标准曲线，因为显⾊反应与温度和时间的变化有关，精准蛋⽩定量宜每次都做标准曲线。 
5）本公司所有产品仅限用于研发，必须专业人员操作同时佩戴口罩/手套/实验服并遵守生物实验室安全操作规程！

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