中文名:2×Taq Plus MasterMix (Dye)
英文名:2×Taq Plus MasterMix (Dye)
货号:T665602
存储温度:-20°C储存
产品介绍:
本品是由Taq Plus DNA Polymerase、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组
成的预混体系,浓度为2×。与Taq DNA Polymerase相比,Taq Plus DNA Polymerase
扩增效率更高,保真性更优秀。独创的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定,超过
98%的PCR扩增能一次成功,同时复杂模板也能得到有效扩增,并可最大限度地减少
人为误差和污染。本产品已加入染料(蓝色),反应结束后可直接进行电泳检测。扩
增得到的大部分PCR产物3′端附有一个“A”碱基,因此可直接用于T/A克隆。主要适用于
常规PCR反应和对高保真性有要求的基因克隆等实验。
| T665602 |
Component |
5ml |
25ml |
40ml |
Storage |
| T665602A |
2×Taq Plus MasterMix (Dye) |
1ml×5 |
5ml×5 |
1ml×40 |
-20℃. Avoid freeze/thaw cycle. |
| T665602B |
ddH2O |
1ml×5 |
5ml×5 |
1ml×40 |
-20℃. Avoid freeze/thaw cycle. | |
质量控制
经检验无外源核酸酶活性;PCR方法检测无宿主残余DNA;能有效地扩增多种基
因组中的单拷贝基因。
使用方法
以下举例为以人基因组DNA为模板,扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件,实
际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1. PCR反应体系
试剂 | 50 μl反应体系 | 终浓度 | 2×Taq Plus MasterMix(Dye) | 25 μl | 1× | Forward Primer,10 µM | 2 μl | 0.4 μM | Reverse Primer,10 µM | 2 μl | 0.4 μM | Template DNA | <0.5 μg | <0.5 μg/50 μ | ddH2O | up to 50 μl | / |
|
注意:引物浓度请以终浓度0.1-1.0 μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高
引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
2. PCR反应条件
步骤 | 温度 | 时间 | | 预变性 | 94°C | 2 min | | 变性 | 94°C | 30 s | 25-35 cycles | 退火 | 55-65℃ | 30 s | 25-35 cycles | 延伸 | 72°C | 30 s | 25-35 cycles | 终延伸 | 72°C | 2 min | |
|
注意:
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降
低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定,Taq Plus DNA Polymerase的扩增效率为2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太
多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
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