中文名:2xTaq MasterMix
英文名:2xTaq MasterMix
纯度:5 ml
货号:T665627
存储温度:-20°C储存,避免反复冻融
产品介绍:
2×Taq MasterMix是由Taq DNA Polymerase、Mg2+、dNTPs、PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系。预配好的PCR混合液使操作更加简单快捷,并可最大限度地减少人为误差和污染。独创的MasterMix配方使扩增产物得率高,重复性强,稳定性好。本品不含染料,PCR程序结束后可根据需要加入适量上样缓冲液后进行电泳操作。扩增得到的PCR产物3’ 端附有一个“A”碱基,因此可直接用于T/A克隆。主要适用于PCR法扩增DNA、DNA序列测定等实验
质量控制:
| T665627 | Component | 5ml | Storage | | T665627A | 2×Taq MasterMix | 5×1ml | -20℃. Avoid freeze/thaw cycle. | | T665627B | ddH₂O | 5×1ml | -20℃. Avoid freeze/thaw cycle. |
Notes: 2×Taq MasterMix contains Taq DNA Polymerase, 3mM MgCl2 and 400µM each dNTP
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经检验无外源核酸酶活性;PCR方法检测无宿主残余DNA;能有效地扩增多种基 因组中的单拷贝基因。
使用方法:
以下举例为以人基因组DNA为模板,扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件,实 际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1. PCR反应体系
| 试剂 | 50 μl反应体系 | 终浓度 | | 2×Taq MasterMix | 25 μl | 1× | | Forward Primer,10 µM | 2 μl | 0.4 μM | | Reverse Primer,10 µM | 2 μl | 0.4 μM | | Template DNA | <0.5 μg | <0.5 μg/50 μl | | ddH2O | up to 50 μl | / |
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注意:引物浓度请以终浓度0.1-1.0 μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高 引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
2. PCR反应条件
| 步骤 | 温度 | 时间 | / | | 预变性 | 95℃ | 2 min | / | | 变性 | 94℃ | 30 s | 25-35 个循环 | | 退火 | 55-65℃ | 30 s | 25-35 个循环 | | 延伸 | 72℃ | 30 s | 25-35 个循环 | | 终于延伸 | 72℃ | 2 min | / |
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注意:
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降 低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定,本产品Taq DNA Polymerase的扩增效率为2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太 多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
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