中文名：汽巴蓝琼脂糖（蓝胶）

英文名：Cibacron Blue Agarose

英文别名：Cibacron Blue|84166-13-2|Cibacron Blue 3G-A|Cibacron blue 3GA|1-amino-4-[4-[[4-chloro-6-(2-sulfoanilino)-1,3,5-triazin-2-yl]amino]-3-sulfoanilino]-9,10-dioxoanthracene-2-sulfonic acid|CHEMBL572528|GST Inhibitor-1 (Cibacron Blue 3G-A, Sodium Salt)|1-Amino-

货号：C377819

Cas号：84166-13-2

存储温度：2-8°C储存

产品介绍：

烟酸蓝琼脂糖可用于分离需要NAD +和NADP，白蛋白，干扰素，类固醇受体和25-二羟基维生素D3受体的酶。已经显示它可以结合几种与核苷酸辅因子具有已知亲和力的酶。烟酸蓝琼脂糖也已显示出结合脱氢酶，激酶，限制性核酸内切酶，白蛋白和干扰素的能力。

产品性能:

外观 蓝色浆状物，球形，表面光滑 基质 0.06高度交联琼脂糖 配基 汽巴蓝 配基浓度 7.3mg/mL 介质 动态结合载量 >18mgHSA /mL 介质 推荐流速 <300cm/h（根据柱尺寸调整） 粒径范围 45~ 165μm（平均粒径 90μm） 耐受耐压 0.3MPa 耐受 pH 长期：4~ 12；短期：3- 13 化学稳定性 8M 尿素，6M 盐酸胍，70%乙醇 保存 保存：20%乙醇， 2~8℃ , 冷藏更佳，切勿冷冻，定期更换保 存溶液。 清洗与再生 可用 1M NaOH 溶液浸泡 1~2 h 以达到灭菌效果；根据污染物 类型用 1M NaOH 、2M NaCl 、70%乙醇、30%异丙醇、超纯 水等冲洗多个柱体积到达清洗再生的效果。

产品使用:
1. 填料准备
根据需要由公式：介质体积=柱高×截面积×压缩因子（压缩因子=1. 15）计算C377819 介质体积；真空抽滤去除介质保存溶液，再用超纯水反复抽洗，最后将介质用超纯水或平衡待用缓冲液混成 50-75%的悬浮液备用（溶液需要经过孔径为 0.45 或0.22μm滤膜过滤并脱气处理）；或用超纯水置换保存液至乙醇含量小于 2% ，然后将介质用超纯水或平衡待用缓冲液混成 50-75%的悬浮液备用。
2. 层析柱准备
事先将层析柱消毒、洗净，用超纯水或待用缓冲液冲洗柱壁，并排除层析柱上下两端适配器中的气泡，将层析柱底部适配器与柱体连接，关闭柱底阀门，向层析柱中加入 3cm左右高度缓冲液/超纯水，静置 5min ，检查是否漏液。
3. 装入柱料
将层析柱固定，连接装柱器（如果需要），用水平尺校正水平，将上述介质悬浮液搅拌均匀，在玻璃棒的引流下，沿层析柱内壁一次性装入，避免引入气泡；待层析介质自然沉降后，层析柱上端适配器连接仪器泵或者蠕动泵，排除适配器中气泡后安装适配器至胶面上 2-3cm ，避免使介质重新悬起。
4. 压柱
为得到理想柱效，应先以较低流速让液体缓慢流过层析柱，再逐渐增加至最大压柱流速，确保装柱时压力不超过 0.3MPa ，走流速直至层析柱中胶面高度不再变化，标记胶面位置，停泵，将上端适配器压至标记高度下 0.5cm ，锁紧适配器，封堵出口，完成装柱。如果使用装柱器，待装柱器中的层析介质全部压入柱体内，卸下装柱器，连接柱体上端适配器，将柱头下降至胶面上 0.5cm ，再次压柱，标记胶面位置，停泵，将上端柱杆下压至标记高度下 0.5cm ，锁紧适配器，封堵出口，完成装柱。
5. 柱效测试
5. 1 柱效测定
柱效是衡量色谱柱性能的一项重要指标，主要有两种柱效测试方法：一种是用丙酮，另一种是用氯化钠；前者是在 UV280nm 条件下测定紫外吸收峰，后者是考察电导峰。

  方法一  方法二 样  品 0.01（V/V）丙酮水溶液 0.8~2M NaCl 溶液 缓冲液 去离子水 0.4M NaCl 溶液 上样量 0.01柱体积 0.01柱体积 流 速 15~30 cm/h 15~30cm/h 检测器 UV280nm 电导率仪

5.2 柱效计算（HETP 和 AS 计算方法）

根据 UV 和电导率曲线计算理论塔高度（HETP）、理论塔板数（N）和非对称因子
（As），公式如下：
N=5.54(VR/Wh)2
HETP=L/N
As=b/a
其中：VR ：保留体积；Wh ：50%峰高处的半峰宽；
VR 和 Wh 的单位应一致；L：柱高；N：理论塔板数；
a/b：将 10％峰高处前半峰的宽度设为 a, 同高度处后半峰的宽度设为 b；
5.3 判断标准
一般来说，当 HETP/填料粒径（dp）=3（或 N>100000/平均粒径/3），峰的非对称因子（As）在 0.8- 1.8 之间，认为柱效较高。
6. 清洗
用 0.5- 1.0M NaOH 清洗 2-3CV ，用超纯水清洗至中性。
7. 平衡
根据样品的稳定性、活性、等电点选择合适的缓冲液、pH 范围，低 pH 5.5⁓8.5 和低离子强度 5⁓50mmol/L 结合缓冲液能促进蛋白的结合，另外 0.1⁓ 10mmol/L 的金属离子（如 Mg2+ 、Ca 2+ 、Zn2+ 、Mn2+ 、Cu2+ 、Co2+ 、Fe3+和 Al3+）可以增强蛋白质的结合。层析实验开始前需测定结合缓冲液电导、pH ，以合适的流速平衡层析柱，当仪器检测电导、pH 值达到结合缓冲液的初始值说明层析柱平衡好，一般需要 2~5CV。
8. 上样
可以用样品环或泵等装置上样，样品需经孔径为 0.45 或 0.2μm滤膜过滤并脱气处理；样品配制溶液应尽可能与结合缓冲液一致，上样量根据动态结合载量或者实际测定载量来确定。
9. 清洗
上样后继续用平衡缓冲液清洗至紫外吸收值回归基线。
10. 洗脱 

C377819层析介质可以使用盐浓度、pH 两种洗脱类型，线性梯度、步级梯度、等度洗脱等方式，可分管收集后确定目的蛋白的洗脱条件。
11. 再生

C377819层析介质在一次上样、洗脱结束后，为确保下次实验结果的可重复性，需用高浓度的盐，比如 1~2M 氯化钠冲洗层析柱，特殊情况下也可再用 0.5~ 1M 氢氧化钠冲洗层析柱，注意，一定要用超纯水或结合缓冲液将层析柱冲洗至离子强度、pH 稳定方可继续平衡再次使用。

12. 层析柱 CIP（Cleaning In Place）
C377819 在多次使用后，会结合并聚集大量杂蛋白，造成柱子堵塞，反压增大，影响流速与载量，需要定期对层析柱清洗与再生，根据纯化样品情况选择 CIP 方式。
① 选用 2M NaCl 冲洗多个柱体积以除去结合能力较强的物质；
② 选用 1M NaOH 溶液冲洗多个柱体积以除去沉淀、疏水性较强物质；
③选用 70%乙醇或 30%异丙醇冲洗多个柱体积以除去脂类物质（使用高浓度有机溶剂时，为避免气泡产生，应逐步增加有机溶剂浓度如采取梯度方式）；冲洗结束后需要用超纯水或缓冲液冲洗至电导、pH 稳定。
13. 层析介质储存
清洁和再生后的层析介质保存于 20%中，建议 4-30℃保存，建议 2-3 个月更换一次20%乙醇，防止乙醇挥发导致微生物滋生。

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