中文名：铜检测试剂盒

英文名：Copper Assay Kit

纯度：足以进行96次色度测试

货号：C486478

存储温度：2-8°C储存

产品介绍：

检测原理：在酸性条件下，铜离子从铜蓝蛋白上解离下来，与络合剂3,5-DiBr-PAESA反应，产生紫色络合物，在一定范围内吸光度值与浓度成正比。
用途：本试剂盒适用于检测血清、血浆、动物组织样本中铜离子含量。
样本类型： 血清;血浆;动物组织
灵敏度： 1.84 μmol/L
检测范围： 1.84-60 μmol/L
精密度： 批间差：3.1% | 批内差：3%
检测仪器及波长： 酶标仪（575-585 nm）

产品组成：

使用方法：
一、所需自备物品
仪器：酶标仪（575-585 nm）、37℃恒温箱
试剂：双蒸水
二、试剂准备
① 检测前，试剂盒中的试剂平衡至室温，试剂一37°C孵育直至澄清。
② 试剂二工作液的配制：
临用前，取一支试剂二，加入1.25 mL双蒸水混匀，即为试剂二工作液，2-8℃保存5天。
③ 显色剂工作液：
将试剂一：试剂二工作液按14：1的体积比混匀，现用现配。
④ 不同浓度标准品的稀释：
编号                              ①   ②   ③   ④   ⑤   ⑥   ⑦   ⑧
标准品浓度(μmol/L)      0     5    10   20  30  40   50  60
100 μmol/L 标准品(μL) 0     5    10   20  30  40   50  60
双蒸水(μL)                   100 95   90   80  70  60   50  40

三、样本准备
① 样本处理
样本要求：血浆样本不能用 EDTA、柠檬酸盐等螯合剂作为抗凝剂。建议使用肝素作为抗凝剂
血清血浆样本：直接进行测定。
组织样本：匀浆介质为双蒸水，匀浆离心取上清待测，留取部分上清用于蛋白浓度测定。
② 样本的稀释
在正式检测前，需选择2-3个预期差异大的样本稀释成不同浓度进行预实验，根据预实验的结果，结合本试剂盒的线性范围：1.84-60 μmol/L。

四、实验关键点
① 血清、血浆样本须澄清，避免溶血。血浆抗凝剂必须是肝素。
② 在通风良好的地方操作。

五、操作步骤
① 标准孔：取20 μL 8个不同浓度的标准品，分别触底加入对应的标准孔中；
测定孔：取20μL待测样本，触底加入样本孔中。
② 向步骤①中各孔加入300 μL显色剂工作液。
③ 盖上覆膜，37℃孵育5 min。
④ 酶标仪580 nm，测各孔OD值。

六、操作表

七、结果计算
标准品拟合曲线：y = ax + b
血清(浆)中铜离子浓度计算公式：
铜离子含量（μmol/L）= (ΔA580 - b) ÷ a × f
组织样本中铜离子浓度计算公式：
铜离子含量(μmol/gprot) = (ΔA580- b) ÷ a ÷ Cpr × f
注解:
y：标准孔OD值-空白孔OD值(标准品浓度为0时的OD值)
x：标准品的浓度
a：标准曲线斜率
b：标准曲线截距
ΔA580：样本测定OD值-空白OD值
Cpr：待测样本的蛋白浓度(gprot/L)
f：样本加入检测体系前的稀释倍数

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