中文名：富马酸检测试剂盒

英文名：Fumarate Assay Kit

纯度：96T

货号：F486219

存储温度：-20°C储存

产品介绍：

本试剂盒仅供研究使用。

使用目的： 

本试剂盒用于测定样本中延胡索酸(fumric cid)的含量。 

实验原理： 

本试剂盒应用酶联免疫竞争法测定标本中延胡索酸(fumric cid)水平。用纯化的延胡索酸(fumric cid)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入延胡索酸(fumric cid)，和 HRP 标记的延胡索酸(fumric cid)抗原，使它们竞争结合，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。样本颜色的深浅和样品中的延胡索酸(fumric cid)的含量呈负相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中延胡索酸(fumric cid)的含量。

试剂盒组成：
1. 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶
2. 酶标试剂 6ml×1 瓶
3. 酶标包被板 12 孔×8 条
4. 显色剂 A 液 6ml×1 瓶
5. 显色剂 B 液 6ml×1 瓶
6. 终止液 6ml×1/瓶
7. 样品稀释液 6ml×1/瓶
8. 标准品 S1（200ng/L） 0.5ml×1 瓶
标准品 S2（100ng/L） 0.5ml×1 瓶
标准品 S3（50ng/L） 0.5ml×1 瓶
标准品 S4（25ng/L ） 0.5ml×1 瓶
标准品 S5（12.5ng/L） 0.5ml×1 瓶
9.  封板膜 2 张 

标本要求 ：

1．标本处理：（1）水样 采集后经 -20℃反复冻融三次，再经玻璃纤维过滤后，备查 （2）组织 样品用丁醇：甲醇：水(5：25：70 V：V：V)抽提，或按相 关文献提取进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验， 可将标本放于-20℃保存，备查 

2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 

操作步骤：

1. 加样：分别设标准孔、空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、 待测样品孔。在酶标包被板上标准孔中加 50 微升，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl， 然后再加待测样品 10μl（样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

2. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。 

3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 60 分钟。 

4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用 

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。

6. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15 分钟. 

7. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 

8. 测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。  

计算：

以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标 准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数， 即为样品的实际浓度。

注意事项：

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 1 小时后方可使用，酶标包被板开封后如未用完， 板条应装入密封袋中保存。 

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 

4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值 大于标准品孔第一孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计 算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。 

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。 

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 

9．本试剂不同批号组分不得混用。  

检测范围：

4ng/L -250ng/L 

保存条件及有效期：

1．试剂盒保存：2-8℃。 

2．有效期：6 个月

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