中文名：罗丹明标记鬼笔环肽

英文名：Rhodamine-Phalloidin

货号：P378705

存储温度：避光,-20°C储存

产品介绍：

这种橙色荧光鬼笔环肽缀合物（相当于TRITC 标记的鬼笔环肽）会选择性结合F-肌动蛋白。鬼笔环肽衍生物经常以纳摩尔浓度使用，常在甲醛固定和透化的组织切片、细胞培养或无细胞实验中用于标记、鉴定和定量F-肌动蛋白的便捷探针。鬼笔环肽与肌动蛋白丝的结合比与肌动蛋白单体的结合要紧密得多，从而导致肌动蛋白亚基从丝端解离的速率常数降低，从而通过防止丝解聚而基本稳定了肌动蛋白丝。而且，发现鬼笔环肽抑制F-肌动蛋白的ATP水解活性。鬼笔环肽在细胞中不同浓度下的功能不同。当以低浓度引入细胞质时，鬼笔环肽将聚合度较低的胞质肌动蛋白和纤维蛋白吸收到聚集的肌动蛋白聚合物的稳定“岛”中，但它不会干扰应力纤维，即厚的微丝束。鬼笔环肽的性质是研究F-肌动蛋白在细胞中分布的有效工具，方法是用荧光类似物标记鬼笔环肽并将其用于染色肌动蛋白丝以进行光学显微镜观察。鬼笔环肽的荧光衍生物已被证明在定位活细胞或固定细胞中的肌动蛋白丝以及体外观察单个肌动蛋白丝方面非常有用。荧光鬼笔环肽衍生物已被用作高分辨率研究肌动蛋白网络的重要工具。

鬼笔环肽是从致命的伞形毒蕈蘑菇中分离出来的一种毒素。它是特异性结合于F-肌动蛋白的双环肽。因此用荧光染料标记的鬼笔环肽可以非常方便的研究F-肌动蛋白的分布。鬼笔环肽内部，在半胱氨酸和色氨酸之间含有不常见的硫醚桥形成内环结构。在pH升高时，该硫醚被裂解，鬼笔环肽失去对肌动蛋白的亲和力。

单位定义：一个单位（T）的定义是染色一个加载细胞的载玻片所用染料的量

Abs/Em (nm)：546/575

应用范围：

细胞骨架染色
使用方法：

1. 储液制备

罗丹明标记的鬼笔环肽：取适量甲醇或无菌水溶解棕色管中冻干的粉末，制备成 200T/mL 的储液（300T 规格染料加入 1.5 mL 的液体，50T 规格染料加入 0.25 mL 的液体即可）。

罗丹明标记鬼笔环肽的一个单位（T）的定义是染色一个加载细胞的载玻片所用染料的量。对于罗丹明标记的鬼笔环肽，使用时的推荐稀释比例为 1: 40-1: 200，一个单位相当于 200 μL 总染色体积中加入 1-5 μL 200T/mL 储备溶液。

注：稀释比例可以根据实际染色效果进行适当调整。

2. 固定细胞染色

以下方案是针对生长在玻璃盖玻片或 8 孔室玻片上的贴壁细胞的染色步骤。鬼笔环肽也可用于染色固定的冷冻或石蜡组织切片。

（1）用 PBS 清洗细胞 3 次。

（2）用含有 3.75%甲醛的 PBS 溶液固定细胞，冰上固定 15 min。

注：甲醇可以在固定过程中破坏肌动蛋白。因此最好避免含有任何甲醇的固定剂。优选的固定剂是不含甲醇的甲醛。

（3）用 PBS 清洗细胞 3 次。

（4）用含 0.5% Triton X-100 的 PBS 溶液在室温下透化细胞 10 min。

（5）用 PBS 清洗细胞 3 次。

（6）用 200 μL PBS 稀释 1-5 μL 荧光标记的鬼笔环肽储液，加入一个盖玻片或孔中，室温孵育 20 min，进行染色。

注：染色体积可根据样本情况进行调节。孵育过程中为避免染液挥发，可将盖玻片放于密封容器内。

（7）用 PBS 清洗细胞 2-3 次。

（8）荧光显微镜观察。标记的鬼笔环肽具有很好的光稳定，样品可以在 PBS 中成像，但为了效果最佳，也可以使用抗荧光淬灭剂观察。

3. 活细胞染色

荧光标记的鬼笔环肽不具有细胞透性，因此没有被广泛用于活细胞标记。然而，有报道称活细胞可能通过胞饮或未知机制进行标记。一般来说，染色活细胞时需要更多的染料。或者，荧光标记的鬼笔环肽也可被注入到细胞中用于监测肌动蛋白分布和细胞运动

注意事项：

1. 使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验；

2. 本产品为冻干粉形式，微量不易观察，使用前请瞬时离心，加适当溶剂溶解后使用，溶解后的溶液近乎透明色；

3.若配制成水溶液，应小量分装保存。

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