哺乳动物稳定转染细胞系构建

通过脂质体介导转染法及电穿孔等基因转染技术，将靶基因被导入细胞后，一般在转染后48小时，靶基因即在细胞内表达。根据不同的实验目的，48小时后即可进行靶基因表达的检测等实验（即瞬时转染）。如若建立稳定的细胞系，则可对靶细胞进行筛选，根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物，zei常用的真核表达基因载体的标志物有潮霉素（hygromycin）和新霉素（neomycin）。筛选后可以得到稳定表达外源基因的细胞克隆，这就是稳定转染。稳定转染的质粒DNA整合到染色体上，使得转染的细胞可长期表达。

应用：
目的基因过表达稳定表达细胞系建立
目的基因RNAi干扰沉默的细胞系建立
microRNA过表达/干扰的细胞系建立

实验原理应用：

    稳转细胞株是指经合适的药物浓度进行药物筛选后，得到外源DNA稳定整合到宿主染色体，并可以长时间表达外源目的基因的细胞。稳定表达细胞株弥补了瞬时感染（或转染）实验中外源基因表达时间短的缺陷，便于长期观察。稳转细胞的筛选需根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物，常用的抗性筛选有嘌呤霉素（puromycin）、潮霉素（hygromycin）、新霉素（neomycin）、灭稻瘟素（Blasticidin）等。若实验需求构建稳转细胞株，我们建议通过慢病毒感染细胞进行药物筛选的方法，此方法较质粒转染可以更加有效的将外源基因整合入基因组，且整合位点处于转录相对活跃的区域，从而获得更加高效表达外源基因的稳转株细胞。

实验流程


 

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