基因组文库（Genomic Library）构建

基因组文库（Genomic Library）构建

简介：

用限制性内切酶切割细胞的整个基因组DNA，可以得到大量的基因组DNA片段，然后将这些DNA片段与载体连接，再转化到细菌中去，让宿主菌长成克隆。这样，一个克隆内的每个细胞的载体上都包含有特定的基因组DNA片段，整个克隆群体就包含基因组的全部基因片段总和称为基因组文库。基因文库＝基因组文库＋cDNA文库 。  

载体的种类和特征：

基因组文库构建步骤：

1、载体： 

噬菌体：48.5kb,插入型(最多可容纳9kb)、取代型(可容纳 38-51kb，最适19-20kb)， EMBL, Charon 粘性质粒(Cosmid)：4-6kb, 质粒+噬菌体的性质，可容纳大片段的外源基因，最多可容纳46kb。 
酵母人工染色体克隆体系（YAC，Yeast Artificial Chromosome  Cloning System） 插入大小200—1000kb 

2、载体DNA的制备： 高分子量的外源DNA 100-150kb
 载体DNA酶切反应-----载体臂的纯化-----载体脱磷处理 （常用BamHI）   （蔗糖密度梯度离心）  （碱性磷酸酶） 

3、连接和包装：外源片段与两臂之间的比例，包装蛋白 
4、感染宿主菌：选择合适的宿主菌，LE392, NM538, NM539, KW251等 
5、基因组文库的保存和扩增 
6、测滴度：106fu以上

7、保存：氯仿4℃，7% DMSO -70℃

客户提供： 

动物的血或细胞、新鲜植物叶片、活体昆虫或纯化好的DNA样品。

公司提供：

1、文库（10%甘油菌）以及菌落效价（CFU/ml）；

2、随机抽样测序结果。

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