氨基酸代谢组学/蛋白质N端、C端测序

氨基酸代谢组学/蛋白质N端、C端测序

氨基酸代谢组学

威斯腾生物具有雄厚的科研实力及丰富经验的全自动氨基酸分析平台，对外提供检测分析服务，可以对生物样本中40多种游离氨基酸进行定性定量分析。

技术路线及方法：

样品要求

血清： 

样品量要求 ：200ul/sample；一定避免反复冻融。 

血液收集在离心管中静置30分钟进行凝固分层。然后低速离心取上清装载干净的离心管中，再高速离心5分钟，取上清分装到冻存管中，每管0.5ml，-80度冻存寄送。

尿液： 

样本量要求：1ml/例，原则上可以多取一点。 

收集步骤：晨起中段尿（临床）或晨间1小时尿（动物）直接分装到离心管中，每管1ml，添加一滴（约10ul）质量体积为1/100（w/v）的叠氮化钠，-80度冻存寄送。

蛋白质N端、C端测序

几乎所有的蛋白合成都起始于N-端，蛋白质N-端的序列组成对于蛋白质整体的生物学功能有着巨大的影响力。例如N-端序列影响蛋白质的半衰期，同时关联着蛋白亚细胞器定位等，这些与蛋白的功能和稳定性息息相关。对蛋白进行N-端测序分析，有利于帮助分析蛋白质的高级结构，揭示蛋白质的生物学功能。

C端序列是蛋白质和多肽的重要结构与功能部位，对蛋白质的生物功能甚至起决定性作用。此外，由于蛋白翻译后在细胞内需要进一步剪切和修饰，通常不能简单的使用基因序列对C-端或N端做简单的预测，对于蛋白生物制品来说，使用C-端测序必不可少，随着蛋白质组学研究的不断深入，蛋白质C端测序对其功能研究将发挥越来越重要的作用。一些新的蛋白质C端测序方法已建立，提高了灵敏度和重复性，能够在蛋白质组水平应用。

技术原理

蛋白质和多肽N-端测序技术是以Edman化学降解法为基础的，Edman化学降解，其基本原理是包括通过异硫氰酸苯脂与蛋白质和多肽的N-端残基的偶联，苯氨基硫甲酰酞（PTC-肽）环化裂解，和噻唑呤酮苯氨（ATZ）转化为苯异硫尿氨基酸（PTH-氨基酸）三个主要的化学步骤，每个循环从蛋白质与多肽裂解一个氨基酸残基，同时暴露出新的游离的氨基酸进行下一个Edman降解，最后通过转移的PTH-氨基酸鉴定实现蛋白质序列的测定。

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