神经元细胞培养

神经元细胞培养

液体配制：

硼酸硼砂缓冲液：0.05M四硼化钠45ml，0.2M硼酸55ml，pH8.4；

胰酶－EDTA消化液：胰酶－0.125g；EDTA－0.2g；D-Hanks平衡盐液定容至100ml。

所用的培养板、培养瓶或玻片预先经100μg/L多聚赖氨酸硼酸盐缓冲液于37℃包被4h，三蒸水洗三遍晾干备用。

操作步骤如下：

1、出生2 d SD大鼠经戊***钠麻醉后，***酒、75％乙醇消毒腹部皮肤，依次剪开皮肤、肌肉、皮下筋膜，无菌操作下取出胚胎放入预冷的D-Hanks平衡盐液中。

2、在解剖显微镜下分离并取出胚胎大脑皮层，除去脑膜，剪碎组织成约1mm3大小，加入胰酶-EDTA消化液并放入37℃孵箱内消化20min，中间摇晃一次。

3、随后用滴管吸出组织转移到装有预冷的培养液（DMEM＋10％FBS）的离心管内终止消化液作用5min。

4、用滴管吸出组织转移到装有预冷的DMEM＋10％FBS的离心管内，用火焰抛光的巴斯德滴管吹打数次，静置后取上清吸到另一支离心管内。重复上述步骤2～3次。

5、将所收集的上清经200目筛网过滤。

6、过滤后的细胞悬液于800r/min离心5min，弃上清，管内加入新鲜培养液（DMEM＋20％FBS）并吹打成单细胞悬液。

7、细胞计数，调整细胞密度按1.5×10⁵/cm2种入6孔板内，放入CO₂孵箱中培养。培养48h后换液并加入Ara-C使其终浓度为1×10^-5mM/L。Ara-C作用24h后全量换液。以后每隔3天半量换液一次。

无菌操作的注意事项：    

细胞原代培养一定要保持工作区的无菌清洁，先用紫外灯杀菌1h，操作前用75%乙醇消毒，穿上实验服，戴上口罩和帽子，操作时不能大声说话，双手戴上一次性橡胶手套，整个无菌操作都应该在酒精灯的周围进行。

威斯腾实验服务流程

威斯腾生物服务项目

【本平台合作项目】 

分子生物学、细胞生物学、病理染色检测、细胞敲除&敲入、模式与转基因动物、SPF动物保种、免疫学检测、影像学检测、原代培养、细胞药筛、CRISPR/Cas9基因编辑、基因芯片、高通量测序、蛋白组学、代谢组学、高通量高内涵筛选、药效学评价、药理毒理学实验、慢病毒包装与稳转株建立、SiRNA与纳米载药、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务！