产品描述
由iCell团队精心优化的间质干细胞成软骨诱导分化培养基试剂盒，包括适合干细胞成软骨诱导分化的基础培养基和添加物。
本产品可增强间质干细胞向成软骨方向诱导分化的能力。
本产品仅用于科研用途，不可用于诊断、治疗、临床、家庭及其他用途。
使用说明
成软骨诱导分化完全培养基的配制
1. 用75%乙醇擦拭试剂盒中各瓶/管的开口外壁，室温放置数秒使酒精挥发。
a) 地塞米松
b) 抗坏血酸
c) ITS添加物
d) bing酮酸钠
e) 脯氨酸
f) 间质干细胞成软骨诱导分化基础培养基
2. 超净工作台中将以上(a) ~(e)全部加入间质干细胞成软骨诱导分化基础培养基 (f) 中， 制备成软骨诱导分化完全培养基的预混液。
3. 无菌吸取少量成软骨诱导分化基础培养基洗涤各瓶/管，尽可能将所有组分完整地加入基础培养基中，少量残留可能会影响产品性能。
4. 轻晃配制好的预混液，混合均匀之后即可使用。
TGF-β1的稀释
1. 将TGF-β1 小量分装至耐低温储样管中，保存在-20℃或更低的温度下并于6个月之内使用完毕。试剂过期请务必放弃使用。
注意：吸取TGF-β1之前需短暂离心（2400 g）试剂管，使试剂聚集于管底以便取用。
2. 按照比例（1 mL预混液中加入10 μL TGF-β1），吸取实验所需剂量的 TGF-β1，
加入相应体积的预混液中配制成软骨诱导分化完全培养基，轻轻地上下颠倒试剂管以确保试剂混合均匀。
重要提示：配制好的成软骨诱导分化完全培养基必须在 12 小时之内使用。
成软骨诱导分化操作规程
1. 进行成软骨诱导分化实验之前，需要对常规消化后的细胞进行计数。
2. 将3-4×10 5个细胞转移到15 mL离心管中，250 g离心4 min。
3. 吸去上清。加入0.5 mL预混液，重悬上一步离心所得沉淀，以清洗ICELL间质干细胞，室温下150 g离心5 min。
4. 重复步骤3，再次清洗细胞。
5. 将上一步所得沉淀用0.5 mL 间质干细胞成软骨诱导分化完全培养基重悬。
6. 室温下150 g离心5 min。
7. 拧松离心管盖以便于气体交换，将其放置于37℃，5% CO2的培养箱中培养。
注意：
1 此步骤不需要吸掉上清并重悬细胞。
2 24 小时之内不要摇动离心管。
8. 当细胞团出现聚拢现象时（一般为24 h或48 h后，实际视细胞生长情况而定）轻弹离心管底部使软骨球脱离管底悬浮在液体中。
9. 自接种开始计算，每隔2-3 d 给细胞换用新鲜的成软骨诱导分化完全培养基，每管约0.5 mL成软骨诱导分化完全培养基。
注意：小心操作，不要吸出软骨球。
10. 换液之后，轻弹离心管底部使软骨球脱离管底悬浮在液体中。稍加拧松离心管盖放入37℃，5% CO2的培养箱中继续诱导培养。
11. 一般持续诱导21-28天后，可对软骨球进行福尔马林固定和石蜡包埋切片，最后进行阿利辛蓝染色。
阿利辛蓝染色分析
1. 软骨球经石蜡包埋后切片。
2. 染色步骤：
a) 脱蜡和脱水；
b) 阿利辛蓝染液染色30 min；
c) 自来水冲洗2 min；
d) 蒸馏水冲洗1次。
3. 显微镜下观察阿利辛蓝染色效果，阿利辛蓝染色部分显示的是软骨组织中的内酸性粘多糖。
图 1 间质干细胞成软骨诱导分化阿利辛蓝染色效果
产品稳定性及保存条件
1. 所有产品均需避光保存。
2. 保存条件及有效期
3. 所有产品请于保质期内使用，超过保质期，必须放弃使用。
4. 为确保产品质量，请避免反复冻融相关产品。
质量控制
间质干细胞成软骨诱导分化培养基已用间质干细胞进行性能测试。主要的鉴定标准包括：
· 无菌检测（细菌、真菌和支原体检测）
· pH测试
· 渗透压检测
· 内毒素检测
