产品描述
试剂盒包括脂肪间质干细胞成脂诱导分化的基础培养基、优质胎牛血清及培养因子，可增强脂肪间质干细胞向成脂细胞方向诱导分化的能力，仅用于科研用途，不可用于诊断、治疗、临床、家庭及其他用途。
试剂盒组成成分
脂肪间质干细胞成脂诱导分化培养基 A液（诱导培养基）：
* 脂肪间质干细胞成脂诱导分化培养基 A 液基础培养基
175mL
* 脂肪间质干细胞成脂诱导分化专用胎牛血清
20mL
双抗
2 mL
谷氨酰胺
2 mL
胰岛素
400 μL
3-异丁基-1-甲基黄嘌呤
200μL
罗格列酮
200μL
地塞米松
200μL
肪间质干细胞成脂诱导分化培养基 B液（维持培养基）：
* 脂肪间质干细胞成脂诱导分化培养基 A 液基础培养基
175mL
* 脂肪间质干细胞成脂诱导分化专用胎牛血清
20mL
双抗
2 mL
谷氨酰胺
2 mL
胰岛素
400 μL
油红O 染液（工作液）
5 mL
使用说明
成脂诱导分化培养基 A 液的配制
1. 使用前，请将血清置于2-8℃环境中过夜解冻直至血清完全溶解，轻晃试剂瓶以确
保血清混合均匀。本公司血清经热灭活处理，解冻后即可使用。
注意：解冻后的血清中可能会含有少量絮状沉淀，这些物质对产品质量无影响。不建议采取过滤的方法去除沉淀物，此操作会导致血清中部分营养物质流失。
2. 配制前30 min左右，室温溶解地塞米松、胰岛素、IBMX、罗格列酮、双抗和谷
氨酰胺，轻轻地上下颠倒试剂管以确保试剂混合均匀。
注意：在打开盖子前先短暂离心（2400 g），以确保添加试剂能全部收集。
注意：为了确保溶解效果良好，请将 IBMX 放置于 37℃水浴锅中温热直至完全溶解。
3. 用70%乙醇擦拭试剂盒中各瓶/管的开口外壁，室温放置数秒使酒精挥发。
4. 超净工作台中将脂肪间质干细胞专用胎牛血清、双抗和谷氨酰胺全部加入脂肪间质干细胞成脂诱导分化培养基 A 液基础培养基中。
1. 无菌吸取少量A液基础培养基洗涤各瓶/管，尽可能的将所有组分完整的加入A液基础培养基中。
2. 将地塞米松、胰岛素、IBMX和罗格列酮全部加入A 液基础培养基中。
3. 无菌吸取少量A液基础培养基洗涤各瓶/管，尽可能的将所有组分完整的加入A液基础培养基中。
4. 重复操作步骤7。
5. 轻晃配制好的完全培养基，确保混合均匀之后即可使用。
成脂诱导分化培养基 B液的配制
1. 使用前，请将血清置于4℃环境中过夜解冻直至血清完全溶解，轻晃试剂瓶以确保血清混合均匀。本公司血清经热灭活处理，解冻后即可使用。
2. 配制前30 min左右，室温溶解胰岛素、双抗和谷氨酰胺，轻轻地上下颠倒试剂管
以确保试剂混合均匀。
注意：在打开盖子前先短暂离心，以确保添加试剂能全部收集。
3. 用70%乙醇擦拭试剂盒中各瓶/管的开口外壁，室温放置数秒使酒精挥发。
4. 超净工作台中将脂肪间质干细胞专用胎牛血清、双抗和谷氨酰胺全部加入间质干细胞成脂诱导分化培养基 B 液基础培养基中。
5. 无菌吸取少量 B 液基础培养基洗涤各瓶/管，尽可能的将所有组分完整的加入 B 液基础培养基中。
6. 将胰岛素加入B 液基础培养基中。
7. 无菌吸取少量 B 液基础培养基洗涤试剂管，尽可能的将所有组分完整的加入 B 液基础培养基中。
8. 重复操作步骤7。
9. 轻晃配制好的完全培养基，确保混合均匀之后即可使用。
注意：本公司完全培养基试剂盒中的每个成分均为无菌分装，但为确保完全无菌，也可以将混合后的完全培养基进行再次过滤除菌（0.22 μm 滤膜）。
成脂诱导分化操作规程
所需材料
• 0.25%Trypsin-0.04%EDTA
• Phosphate-BufferedSaline (1×PBS)
• iCell脂肪间质干细胞完全培养基
• iCell脂肪间质干细胞成脂诱导分化完全培养基
操作
注意：本操作规程以六孔板为例
1. 将iCell脂肪间质干细胞置于37℃，5% CO2的培养箱中培养。
2. 当细胞融合度达到80%-90%时，用0.25%Trypsin-0.04%EDTA进行消化。
3. 将消化下来的间质干细胞按照2×104 cells/cm2的细胞密度接种在六孔板中，每孔加入2 mL完全培养基。
4. 将细胞置于37℃，5% CO2的培养箱中进行培养。
5. 每隔三天换液，直到细胞融合度达到100%或者过融合。
6. 小心地将间质干细胞完全培养基吸走，向六孔板中加入2 mL iCell 脂肪间质干细胞成脂诱导分化培养基 A 液。
7. 诱导3天后，吸走六孔板中的A液，加入2 mL iCell 脂肪间质干细胞成脂诱导分化培养基B液。
8. 24h后，吸走B液，换回A液进行诱导。
9. A液和B液交替作用3-5次后（12-20天），继续用 B 液维持培养4-7天直到脂滴变得足够大、圆。B 液维持培养期间，每隔2-3天需要换用新鲜的B液。
油红O染色分析
所需材料
• Phosphate-BufferedSaline (1×PBS)
• 4%中性jia醛溶液
• 油红O染液
操作
1. 成脂诱导分化结束后，吸走六孔板中的间质干细胞成脂诱导分化培养基，用1×PBS冲洗1-2次。每孔加入2 mL 4%中性jia醛溶液，固定30 min。
2. 吸走中性jia醛溶液，用1×PBS冲洗2次。每孔中加入1 mL油红O染料工作液染色30min（工作液配制方法：油红O贮存液:蒸馏水=3:2，混匀后用中性滤纸过滤即可）。
3. 吸走油红O染液，用1×PBS冲洗2-3次。
4. 将培养板置于显微镜下观察成脂染色效果。
产品稳定性及保存条件
1. 所有产品均需避光保存。
2. 间质干细胞成脂诱导分化 A 液和 B 液的基础培养基和油红O置于2-8℃保存，保质期为1年；其他成分置于-20℃保存，保质期为2年；完全培养基配制好后于2-8℃中保存，保质期为1个月。
3. 所有产品请于保质期内使用，超过保质期，必须放弃使用。
4. 为确保产品质量，请避免反复冻融相关产品。
质量控制
iCell 脂肪间质干细胞成脂诱导分化培养基已用iCell 小鼠脂肪间质干细胞进行性能测试。
主要的鉴定标准包括：
• 无菌检测（细菌、真菌和支原体检测）
• pH测试
• 渗透压检测
• 内毒素检测
