试验5B：测试物对肝脏药物代谢酶CYP450时间依赖性抑制作用的体外研究（人肝微粒体，7个亚酶，8个底物，IC50偏移法） |
| 目的：采用IC50偏移法评价测试物的代谢产物对CYP450的7个主要的亚酶的时间依赖性抑制作用，即非可逆性抑制作用，进而评价人体中可能的代谢性相互作用。 | |
| 测试物数目： | 1 |
| 测试系统：人肝微粒体 | 1 |
测试酶系（代谢产物）：
CYP1A2: Phenacetin O-deethylation\ CYP2B6: Bupropion-hydroxylation\ CYP2C8: Amodiaquine N-deethylation\ CYP2C9 : Diclofenac 4'-hydroxylation\ CYP2C19: S-Mephenytoin 4'-hydroxylation\ CYP2D6: Dextromethorphan O-demethylation\ CYP3A4: Testosterone 6β-hydroxylation and Midazolom 1-hydroxylation | 8 |
| 测试浓度：5个，根据化合物药效剂量下的血药浓度、溶解度、预期肝浓度、直接抑制IC50等数据确定 | 5 |
| 样本量：三个重复样本（包括对照组） | 3 |
孵育条件：- 微粒体蛋白浓度：0.5-1 mg/mL
- NADPH浓度：1.0 mM
- 温度：37.0 oC
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孵育过程：- 不同浓度测试物分别与人肝微粒体在添加和不添加辅酶NADPH条件下预孵育30分钟后，加入CYP450个亚酶的探针底物，继续孵育5-30分钟；不含有测试物的溶剂组作为阴性对照组（NC）。
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评价参数：- 代谢产物生成相对量
- 相对活性（% of NC）=测试组的代谢产物生成相对量/ NC组的代谢产物生成相对量×100
- 半数抑制浓度（IC50）Y=100/(1+10^((X-LogIC50)))，通过软件 GraphPad Prism 计算。
- Shifted IC50 = IC50（30min pre-incubation -NADPH）/ IC50（30 min pre-incubation +NADPH）
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| 试验周期：20个工作日 | |
