SARS-COV-2假病毒使用说明书

       SARS-COV-2突刺（Spike）糖蛋白通过结合宿主细胞表面ACE2受体感染宿主，因此其是研发诊断性抗体、治疗性抗体、疫苗和诊断方法的关键靶标。围绕这一靶点进行药物开发的过程中需要BSL-3实验条件下通过操作活病毒进行效价测定和攻毒试验，具有一定的生物安全隐患，提高了治疗性抗体研发的门槛，并成为治疗性抗体研发的关键难题。S蛋白重组病毒（Pseudovirus）是一类重组改造反转录病毒，能够整合其他病毒囊膜糖蛋白来形成的具有外源性病毒囊膜, 但仍保持着自身基因组特性。S蛋白重组假病毒可应用于抗体检测，为研究高致病性病毒的治疗性抗体提供一个安全和快捷的平台。目前，尚未有基于新型冠状病毒S蛋白重组假病毒的稳定可靠的检测系统，通过构建与新型冠状病毒有相同感染机制的高滴度的S蛋白重组假病毒，不依赖于BSL-3实验室，建立一个基于S蛋白重组病毒的高通量抗体筛选平台。

产品描述

产品名称：SARS-Cov-2 pseudovirions   
报告基因：可以选择EGFP绿色荧光蛋白与FLuc萤火虫荧光素酶（后者推荐用于目的基因定量分析）
包装规格：1E+6TU/ml，体积为1 mL，分装规格100ul*10管
检测报告：提供感染图片或荧光素酶表达报告
出货标准：
1、96孔板10-20 ul假病毒感染hACE2 293T细胞（约1.5x104个细胞/孔）感染率达到80%以上；
2、上述hACE2 293T细胞细胞株指定为派真生物生产的细胞株，客户自行构建的细胞株或其他厂家细胞株不保证上述效果。
保存要求：假病毒必须保存在-80℃，冻融会影响病毒滴度。如果从-80℃取出，可放置在4℃或冰上操作，必须在24小时内使用完毕。如果未按上述要求操作，则可能出现滴度下降或感染不理想的情况。
生物安全预防措施：Biosafety Level 2 (BSL-2)

假病毒体外感染操作流程

       建议用贴壁感染ACE2表达丰度比较高的细胞株进行感染实验（如hACE2 293T、Huh-7、Vero等做为模型），以96孔板为例进行目的细胞感染实验，如有必要可用无血清培养基稀释病毒原液。

1. 第一天，准备细胞：96孔板接种若干孔细胞，每孔接种约1.5x104个细胞，每孔培养基体积100ul；进行病毒感染时，细胞融合度大约30-50%。
2. 第二天，准备病毒并感染细胞：-80°C冰箱取出病毒先在冰上融化或者4°C融化，根据算好加入的病毒量（以派真生物的hACE2 293T细胞为例，每个96孔板细胞加入10-20ul的假病毒）稀释到培养基中，尽可能保证含有假病毒的培养基为最小体积，以获得最佳感染效果；
3. 更换培养基：一般感染8-20h后将含有病毒的培养液更换为新鲜培养基；感染后注意观察细胞状态，如果假病毒感染对细胞有明显的毒性而影响到细胞状态，则建议在加入病毒4-6h后，更换新鲜培养基。
4. 感染效率检测：一般感染48-72h后（推荐72h感染），在倒置荧光显微镜下观察荧光，估计病毒感染目的细胞的效率；
温馨提示：根据感染效率结果，确定最适的假病毒感染用量；再开始正式的药物筛选实验；