重组质粒构建与基因打靶
面议
- 安诺伦
- -
- 进口
- 北京
- 现货
- -
- 0
- 0
重组质粒构建 流程：1. 目的基因的PCR扩增2. PCR产物纯化3. 载体和PCR产物进行双酶切4. 胶回收5. 载体与目的基因的连接6. 转化7. 菌落PCR
AI问答
配套的仪器设备？
可以搭配的相关耗材试剂？
耗材描述
重组质粒构建
1. 目的基因的PCR扩增
2. PCR产物纯化
3. 载体和PCR产物进行双酶切
4. 胶回收
5. 载体与目的基因的连接
6. 转化
7. 菌落PCR鉴定
8. 重组质粒的抽提
基因打靶（gene targeting）
基因打靶技术是一种定向改变生物活体遗传信息的实验手段。它的产生和发展建立在胚胎干(ES) 细胞技术和同源重组技术成就的基础之上，通过对生物活体遗传信息的定向修饰包括基因灭活、点突变引人、缺失突变、外源基因定位引入、染色体组大片段删除等，并使修饰后的遗传信息在生物活体内遗传，表达突变的性状，从而可以研究基因功能等生命科学的重大问题，以及提供相关的疾病治疗、新药筛选评价模型等。外源DNA与受体细胞染色体DNA上的同源序列之间发生重组，整合在预定位点，改变细胞遗传特性的方法。建立在胚胎干细胞与同源重组的基础之上。是一种定向改变生物遗传信息的实验手段。
实验原理：首先获得ES（胚胎干细胞） 细胞系，利用同源重组技术获得带有研究者预先设计突变的中靶ES 细胞。通过显微注射或者胚胎融合的方法将经过遗传修饰的ES 细胞引入受体胚胎内。经过遗传修饰的ES 细胞仍然保持分化的全能性，可以发育为嵌合体动物的生殖细胞，使得经过修饰的遗传信息经生殖系遗传。获得的带有特定修饰的突变动物提供研究者一个特殊的研究体系，使他们可以在生物活体中研究特定基因的功能。基因打靶的方式：全基因打靶、条件性打靶、诱导性打靶、组织特异性打靶和基因捕获打靶等。
主要步骤：
1. 打靶载体的构建
2. 导入：显微注射法（最常用），电穿孔法，逆转录病毒载体法等；受体细胞一般采用胚胎干细胞（ES）
3. 筛选: (G418和GANC培养基)a) 正负选择系统（G418R/GANCR）b) 正向选择法
4. PCR进一步鉴定
5. 打靶ES细胞导入囊胚
6. 囊胚植入假孕母鼠子宫发育
感兴趣产品