Knockout (基因敲除)细胞系服务

Knockout基因敲除细胞或动物模型一直以来是开展基因功能研究、寻找合适药物作用靶点的重要工具。CRISPR/Cas系统是细菌的一种适应性免疫机制，用来抵抗各种外来核酸的入侵。CRISPR/Cas9技术与ZFN、TALEN相比，更为高效、便捷，成为基因编辑的一个重要工具，在基因工程领域开创了新纪元。改造优化后的CRISPR/Cas9系统由两部分组成：sgRNA和Cas9蛋白。sgRNA特异性识别靶位点后，Cas9蛋白在靶位点附近进行切割，从而形成DSB。

孚博生物凭借先进的技术平台、专业的科研团队，将为您提供各种Knockout基因敲除细胞系服务，甚至是难转染的细胞，如原代细胞、干细胞、神经元细胞等。我们的一站式服务包括：sgRNA设计、筛选高效的sgRNA、敲除载体构建、敲除效率验证等。我们将会在最短的时间内提供给您高质量的单克隆基因敲除细胞系，以及全面的检测报告，包括靶点设计，靶点基因敲除效率检测，克隆筛选及靶基因检测全部过程。

技术流程



 

靶点设计- 根据目的基因设计相应的靶位点，并构建sgRNA表达质粒。

效率检测- 通过Cruiser™ Enzyme酶切及pool细胞测序对设计的sgRNA进行靶点敲除效率检测。

细胞转染- 将cas9和sgRNA质粒转染目的细胞。

克隆筛选- 挑选单克隆细胞，检测细胞基因型。

敲除检测- Cruiser™ Enzyme酶切、TA克隆测序、qRT-PCR 、Western blot 等。

 

应用领域

研究基因的功能及表达调控机制。

构建各种基因突变导致的疾病模型如白化病、阿尔兹海默症、镰刀型细胞贫血症等，从而研究疾病的治疗及诊断方法。

染色体敲除或大片段敲除。

通过设计模版链和同源臂，插入外源基因或修复突变基因，从而进行转基因或突变基因修复实验。

利用Cas9的突变体（dCas9）只能特异性识别结合靶位点，而不能产生DSB的特点，可以进行基因表达调控的研究以及甲基化等表观遗传学研究。

 

技术优势

多样细胞种类- 在H1299、2F-2B、4T1、786-O、9607、THP-1、MCF7/ADR、A549、 V79、CHO、HepG2 等多个种属细胞中成功构建Knockout基因敲除细胞系。

一站式服务- 我们提供从sgRNA设计至敲除结果检测（DNA、mRNA、蛋白水平）的一站式服务，满足客户不同的需求。

各种基因位点- 敲除效率不受靶位点限制。

敲除效率高- 敲除效率达到高，且脱靶效率低，达到100%的准确率。