新一代BLI单浓度动力学筛选（蛋白等生物素标记）

Gator Bio新一代BLI单浓度动力学筛选（蛋白等生物素标记）技术服务说明‌

‌一、技术优势与核心创新‌

1. ‌高通量检测能力‌

• 采用384孔板设计，单次实验可完成1152个样本的高通量筛选，检测周期缩短至2小时‌；

• ‌智能降噪算法‌：基线噪声≤0.003 nm，支持低丰度靶标（如血清蛋白）的弱信号捕捉（检测限0.1 nM）‌。

2. ‌生物素标记兼容性优化‌

• ‌链霉亲和素（SA）探针定向固定‌：
  生物素化蛋白通过SA探针高亲和力结合（KD≤10^-9 M），避免随机偶联导致的活性位点屏蔽‌；

• ‌短链链霉亲和素（SSA）探针‌：
  适用于空间位阻敏感样本（如膜蛋白复合物），缩短结合臂长度（<5 nm）以提高小分子检测灵敏度‌。

3. ‌动态参数实时解析‌

• 单浓度筛选模式下，实时捕获结合速率（Kon）、解离速率（Koff）及亲和力（KD），支持弱结合（KD≥10^-4 M）与快速解离（koff≤10^-2 s^-1）样本分析‌；

• ‌多模型拟合算法‌：支持1:1结合、多价结合及竞争性抑制模型，拟合精度R²≥0.98‌。

二、样本要求与处理规范‌

1. ‌生物素标记标准

2. 标记效率‌：‌

• 化学标记法（Sulfo-NHS-LC-Biotin）：蛋白:生物素摩尔比优化为1:5-1:20，标记效率≥85%（HPLC验证）‌；

• Avi-Tag定向标记：需BirA酶催化，游离生物素残留≤2%‌。

1. 浓度范围‌：
   

• 生物素化蛋白：0.1-50 µg/mL（探针固定相）‌；

• 分析物（小分子/蛋白）：0.5-100 µM（推荐PBS缓冲液pH 7.2-7.4）‌。‌‌

2. ‌缓冲液与基质兼容性‌

• 兼容含去垢剂缓冲液（如0.01% DDM、LMNG），支持膜蛋白（如GPCR）活性构象分析‌；

• 复杂基质（如细胞裂解液）需预过滤（0.22 µm）并添加0.05% Tween-20降低非特异性吸附‌。

‌三、典型应用场景与数据交付‌

1. ‌抗体药物开发‌

• ‌表位分型与交叉反应筛选‌：
  单浓度筛选单抗/双抗与多物种靶标（如人/食蟹猴/小鼠）的亲和力差异，筛选标准：Koff≤1×10^-4 s^-1‌；

• ‌双特异性抗体优化‌：
  验证双抗双靶点结合效率，判定协同效应（KD降低≥3倍为有效协同）‌。

2. ‌蛋白-小分子互作研究‌

• ‌激酶抑制剂库筛选‌：
  通过Koff值排序长效抑制剂（如Koff≤1×10^-5 s^-1），支持片段化合物库初筛‌；

• ‌PROTAC分子三元复合物分析‌：
  检测E3连接酶配体与靶蛋白结合力，优化降解效率（KD≤50 nM为有效阈值）‌。

3. ‌数据输出与合规性‌

• ‌原始数据包‌：实时结合曲线、残差分布图及动力学拟合参数表‌；

• ‌质控文件‌：仪器校准证书（NIST可追溯）、阳性对照重复性报告（CV≤8%）及GLP合规声明‌。

‌四、服务差异化亮点‌

• ‌成本控制‌：SA/SSA探针可重复使用≥20次，单次检测成本为传统SPR的40%‌；

• ‌快速交付‌：标准周期3个工作日。

Gator Bio已累计完成超1,500例生物素标记样本单浓度筛选，数据复现率≥95%‌。

注：请按附件要求填写样本信息表，由小鳄生物进行技术评估。

Gator Bio依托自主研发的Gator®系列生物分子相互作用分析系统‌，提供基于生物膜层干涉技术（BLI）的高精度非标记亲和力检测服务。该服务采用无需生物素标记的实时动态检测方案，可精准解析蛋白等生物分子间的结合/解离动力学参数（包括Ka、Kd、KD值）‌，具备以下核心优势：

Gator生物分子相互作用仪 (BLI)

实验步骤和传感曲线图

• ‌超高灵敏度‌：专利V-Groove光学探针技术‌结合自动调平系统，检测限低至0.025 µg/mL‌，可捕捉弱结合相互作用；

• ‌复杂样本兼容性‌：通过自适应温控模块（4℃-40℃）‌3和可调震荡参数设计，支持血清、细胞裂解液等复杂基质样本的直接分析；

• ‌高通量自动化‌：采用384孔板同步检测系统‌，配合智能分析软件，单日可完成超过200组样本的标准化检测；

• ‌数据可靠性‌：通过ISO认证的质量控制体系，提供原始结合曲线、拟合分析图谱及完整实验报告。

该服务已广泛应用于抗体药物表征、靶点筛选及生物标志物验证领域，为生物制药企业及科研机构提供符合GLP标准的全流程解决方案‌。

一、技术平台与原理‌

‌生物膜干涉（Biolayer lnterferometry，BLI）技术是一种非标记检测方法，通过测量光纤生物传感器表面反射光的干涉图谱来实时检测生物分子间相互作用。Gator Bio光纤生物传感器是先将直径1mm的玻璃光纤的末端镀上专利光学层，再继续镀上特定的化学层，比较光纤生物传感器表面化学层结合生物分子后反射光的干涉图，实时监测由于生物分子积累引起的干涉变化，即可高灵敏地分析和计算目标蛋白质之间的结合和解离速率。结合信号与结合分子的大小和浓度成正相关。

BLI技术优势

Gator Bio创始人2001年正式提出BLI技术。

BLI技术于2021年，作为非标记检测方法被列入《美国药典》，用于检测分子相互作用的方法之一，同时

也被收入了药典有关抗体Fc介导的效应功能活性评价方法的章节。

BLI技术在2024年2月，被国家药吊监督管理局药品审评中心（CDE）列入《抗体偶联药物药学研究与评价技术指导原则》中，作为规范和指导抗体偶联药物（ADC）产品研发与上市申报中检测结合活性的方法之一。

Gator基于BLI技术用于检测生物分子互作优势：

• 样品及缓冲液无需脱气处理，可直接检测粗样

• 检测过程样品消耗很少，可以回收利用

• 多样的探针选择，可根据实验需求定制

• 无流路系统，无堵塞风险，仪器免维护

• 检测和分析一体化软件，操作简单

• 全面的互作信息：定量、动力学、亲和力、表位分组......

Gator检测系统

Gator系统由分析仪器、光学探针、数据采集和分析一体化软件组成。基于新一代生物膜干涉技术（BLI），通过采集、分析光纤生物传感器表面反射干涉光谱的信号变化来实时检测生物分子间的相互作用。从而得到名种生物反应参数，例如亲和力常数、蛋白浓度、表位分组等。具有使用简便、多功能、应用广泛和高通量等特点，可应用于生物药研发、生产以及生命科学研究等种领域。

Gator系统应用范围

Gator系统基于新一代生物膜干涉技术（BLI），较传统BLI产品具有更高的灵敏度和更强大的性能，可检测小到150 Da的小分子、核酸、多肽、蛋白，大到脂质体、病毒等生物分子。可被广泛应用于药物靶点筛选、抗体研发各阶段、分子递送系统、基因治疗AAV衣壳病毒载体表征等领域；可进行抗体滴度测定、解离常数排序、亲和力常数测定、表位分组、AAV衣壳滴度和空壳率检测等应用，满足多种生物分子的检测需求。

‌设备配置‌：

‌Gator® Pro‌：32通道并行检测，单次运行可分析1,152个样本，支持高通量AAV病毒载体分析；

‌Gator® Pivot‌：16通道并行检测，配备温度控制（15℃-40℃）和防蒸发模块，适用于热不稳定蛋白分析；

‌Gator® Plus‌：优化基线稳定性，可检测pM级亲和力参数，兼容96/384孔板。