产品名称：植物RIPA裂解液(强)

产品介绍：

阿拉丁生产的植物RIPA裂解液(Plant RIPA Lysis Buffer)是一种传统的植物细胞、组织或原生质体快速裂解液。 植物RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的PAGE、Western、免疫沉淀(immunol precipitation，IP)、免疫共沉淀(co-IP)和ELISA等。 本产品可以用于植物细胞、组织或原生质体样品，也可以用于动物的细胞或组织样品、真菌或细菌样品。 RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。关于不同的RIPA裂解液以及阿拉丁生产的其它裂解液的主要特点和差异，以及如何选择裂解液可参考我们的相关网页：http://www.aladdin-e.com/。 植物RIPA裂解液(强)的主要有效成分包括1% Triton X-100、1% sodium deoxycholate和0.1% SDS等去垢剂，以及sodium orthovanadate、sodium fluoride、EDTA和leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。

使用说明：

1.对于培养的植物细胞样品：

a.融解植物RIPA裂解液，混匀。取适量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，或者根据实验需要加入适当的上述蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。

b.离心收集植物细胞，按照每50-100万细胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触，在冰上裂解2-10分钟。

c.充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

2.对于植物原生质体样品：

a.把组织剪切成细小的碎片，制备原生质体。

b.(可选)质粒转化原生质体，继续培养16-48小时，并可以根据需要给予适当的实验条件处理。

c.100-500g低速离心收集原生质体。

d.融解植物RIPA裂解液，混匀。取适量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，或者根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。

e.按照每50-100万原生质体加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。轻弹管底以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的原生质体沉淀。如果原生质体量较多，必需分装成50-100万原生质体/管，然后再裂解。大团的50-100万原生质体较难裂解充分，而少量的50-100万原生质体由于裂解液容易和50-100万原生质体充分接触，相对比较容易裂解充分。

3.对于植物组织样品：

a.把植物组织剪切成细小的碎片。

b.融解植物RIPA细胞裂解液(强)，混匀。取适量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，或者根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。

c.按照每20毫克植物组织加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)

d.用玻璃匀浆器匀浆，或使用阿拉丁生产的E6600 TissueMaster™手持式组织研磨仪研磨，直至充分裂解。也可以把组织样品冷冻后液氮研磨，研磨充分后加入裂解液进行裂解。

e.充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

f.如果植物组织样品本身非常细小和柔嫩，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器或研磨设备，缺点是不如匀浆或研磨那样裂解比较充分。

注：植物RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。

储存温度：-20°C储存

运输条件：超低温冰袋运输

稳定性与储存：-20℃保存，一年有效。

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