酶切位点:Kex2蛋白酶是钙离子依赖性蛋白水解酶,能特异性识别和切割Arg-Arg(精氨酸、Arginine、R)、Lys-Arg(赖
氨酸、Lysine、K)等双碱基氨基酸羧基端肽键,与胰蛋白酶不同,Kex2不能识别和切割单一碱性氨基酸即精氨酸或赖氨酸的羧基端肽键。
酶学性质:重组Kex2蛋白酶是由毕赤酵母表达生产,与天然的酿酒酵母Kex2酶具有相同的酶特异性。
基本特性:重组Kex2蛋白酶又称为重组双碱基内切酶、YSCF蛋白酶、Kex2蛋白酶,在酵母体内Kex2蛋白酶负责加工killer toxin和α-factor的前体。Kex2蛋白酶活性不受常规的丝氨酸蛋白酶抑制剂如抑肽酶、PMSF、TPCK所抑制。最适作用pH为9.0,稳定储存的pH为5.0-6.0。
活力定义:在25℃,50mM Tris-HCl,2mM CaCl2,pH8.0的3ml反应体系中,每分钟催化底物Boc-QRR-pNA释放出1μmol对硝基苯胺(4-nitroaniline)的酶量定义为一个酶活单位(Unit)。
推荐反应缓冲液:pH 7.0-9.0,50 mM Tris-HCl,2 mM Ca2+ 或者HEPES,5 mM Ca2+。若溶解后不马上使用,建议使用20 mM (pH 5.2) NaAc-HAc,2mM Ca2+ 缓冲液溶解冻干粉,溶解后酶的终浓度约为1-10mg/ml,按照需要分装后储存-20℃以下储存。反应时,用pH 7.0-9.0,50mM Tris-HCl,2mM Ca2+ 或HEPES,5mM Ca2+作为反应稀释液。
注:酶的最适反应pH为9.0,稳定pH为5.0-6.0。