UltraBio™ 环氧基磁珠 (1μm)，BioReagent, 10 mg/mL

中文名：UltraBio™ 环氧基磁珠 (1μm)

英文名：UltraBio™ Epoxy Magnetic Beads (1μm)

纯度：BioReagent, 10 mg/mL

货号：E1456039

存储温度：2-8°C储存,禁止冷冻

产品介绍：

储存缓冲液：100% Isopropyl Alcohol 

UltraBio™ 环氧基磁珠 (1μm) 是一种环氧活化的具有超顺磁性的磁性微粒，是一种被广泛应用的功能性生物磁珠，主要用于生物分析检测，可以直接用于含氨基、巯基和羟基的蛋白和样品的耦联。预活化介质可以根据需要制备成特殊的亲和介质，快速有效地从复杂体系中一步纯化相应的物质。 

使用说明：

一、缓冲液准备

偶联液：0.1M Na2CO3，pH 9.5

封闭液：1M 乙醇胺，pH 8.0

清洗液1：0.1M 乙酸-乙酸钠，0.5M NaCl，pH 3.0

清洗液2：0.1M Tris-HCl，0.5M NaCl，pH 8.0

保护液：PBS，0.01% Tween-20，0.02% NaN3

注：样品用偶联液溶解，浓度约5-10 mg/mL。偶联液可以选择碳酸盐、磷酸盐等不含氨基的缓冲液体系。

二、样品偶联

1、准备适量的UltraBio™ 环氧基磁珠 (1μm)（磁珠浓度为10mg/mL），将磁珠反复颠倒，充分混匀，使用移液器取适量的磁珠悬浮液，置于离心管中，将离心管置于磁分离器上，大约1min，待溶液变澄清后，用移液器吸弃清液。 

2、再将离心管磁分离器上取下来，加入去离子水，使用枪头反复吹打5-10次，将离心管置于磁分离器上，大约1min，待溶液变澄清后，用移液器吸弃清液，重复洗涤1次。再用偶联液清洗1次。 3、将准备好的样品加入到处理好的磁珠中（磁珠在样品中浓度约30-50mg/ml），颠倒混匀。将离心管置于混合仪上，室温孵育24至48h。确保磁珠混匀，否则影响偶联效率。 

4、将离心管置于磁分离器，大约1min，待溶液变澄清后，用移液器移出上清液，保留，以备取样检测。分别用去离子水清洗，清洗液1、去离子水、清洗液2和去离子水重复清洗磁珠2次，然后保存在等体积的保护液中，于2-8℃保存。

三、纯化流程

下面以磁珠偶联抗体后，纯化抗原为例，介绍纯化步骤。 

1、缓冲液的准备

所用水和缓冲液在使用之前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。

平衡/洗杂液：0.15M NaCl，20mM Na2HPO4，pH 7.0

洗脱液：0.1M 甘氨酸，pH 3.0

中和液：1M Tris-HCl，pH 8.5

2、磁珠预处理

将偶联好的磁珠混合均匀，取计算量（根据上样量和磁珠载量计算）的磁珠悬浮液（后文均以100μl为例），转移至离心管中，放置在磁分离器上，静置大约1min，待溶液变澄清后，用移液器吸弃上清液。再将离心管从磁分离器上取下来，加入与所取磁珠悬浮液等体积（100 μl）的平衡液，使用枪头反复吹打5次，将离心管置于磁分离器上，大约1min，待溶液变澄清后，用移液器吸弃上清液，重复洗涤2次。 

3、样品吸附

在步骤2预处理的磁珠中加入样品溶液，漩涡振荡均匀，在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管，促使样品和磁珠充分接触并吸附，混合30min以上（具体时间根据结合效果调整），置于磁分离器上，大约1min，待溶液变澄清后，吸弃上清液。 

4、洗杂

向离心管中加入初始磁珠悬浮液5倍体积（500μl）的洗杂液，振荡悬浮，混合1-2min，然后置于磁分离器上，大约1min，待溶液变澄清后，吸弃上清液。该操作重复2次。

5、洗脱

在上述离心管中加入3-5倍悬浮液体积（300-500μl）的洗脱液，用移液器吹打5次， 然后在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管，5-10min后，置于磁分离器上，大约1min，待溶液变澄清后，吸取上清液，收集洗脱组分，即为目标蛋白。 

6、洗脱组分中和

向洗脱组分中加入洗脱体积十分之一的中和液，调节pH值至7.0-8.0。 

7、磁珠保存

使用后的磁珠用1ml洗脱液重悬磁珠，然后置于磁分离器上，大约1min，待溶液变澄清后，吸弃上清液。该操作重复2次。再加入1ml 平衡液，悬浮磁珠，然后置于磁分离器上，大约1min，待溶液变澄清后，吸弃上清液。加入步骤一中的保护液至磁珠浓度为10mg/ml， 置于2-8℃保存。

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