苏木素伊红 (HE)染色试剂盒 (含分化液和返蓝液) ，BioReagent, 生物染色剂, 用于显微镜

中文名：苏木素伊红 (HE)染色试剂盒 (含分化液和返蓝液)

英文名：Hematoxylin-Eosin (HE) Staining Kit (with Differentiating Solution and Bluing Solution)

纯度：BioReagent, 生物染色剂, 用于显微镜

货号：H1508459

存储温度：避光,室温

产品介绍：

苏木素 (Hematoxylin)和伊红 (Eosin)联合染色简称HE染色，是病理学常规制片中最基本的染色方法，应用极其广泛，苏木精是从原产于中南美州的洋苏木中提取出来的浅黄褐色的结晶，是一种碱性染色剂，它在被氧化后生成苏木素，同媒染剂(常用的是三价的铝或盐铁)一起使用，能够使细胞核染色。在病理诊断、教学和科研工作中，常用HE染色对正常组织和病变组织进行形态结构观察，可确定或鉴别病变组织、细胞中出现的某些异常物质与特殊成分，而需要采用的特殊染色方法、酶组织化学方法、免疫组织化学方法等也均是在观察HE染色组织切片的基础上进行的，在HE染色的组织切片中细胞核呈蓝色，细胞浆呈红色，二者形成鲜明的对比，易于观察分析。

苏木素伊红 (HE)染色试剂盒 (含分化液和返蓝液)中苏木素染色液采用自主研发的配方，由进口的高纯度苏木精、氧化剂等组成，不含氧化汞、甲醇等有害物质，对细胞核染色效果好，其特点是不易产生沉淀和金属膜；应用范围广，可以用于人、动物、畜牧、水产等领域，可以用于组织石蜡切片、冰冻切片和组织细胞的染色等。苏木素染色液和伊红染色液均可以重复使用。该产品仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

染色原理：

1、细胞核染色原理：苏木素为碱性天然染料，可使细胞核着色，细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA双螺旋结构中两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木素在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。

2、细胞浆染色原理：伊红是一种化学合成的酸性染料，在一定条件下可使细胞浆着色，细胞浆的主要成分是蛋白质，为两性化合物，细胞浆的染色与染液的pH值密切相关，当染色液pH值在胞浆蛋白质等电点(4.7-5.0)以下时，胞浆蛋白质以碱式电离，则细胞浆带正电荷，就可被带负电荷的酸性染料染色。伊红在水中离解成带负电荷的阴离子，与胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合，使细胞浆着色，呈现红色。

3、分化作用：染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。在HE染色中常用0.5-1%盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木素的醌型结构，使组织与色素分离而退色。大多数组织经苏木素染色后，必须用盐酸乙醇分化，使细胞核过多结合的苏木素染料和细胞浆吸附的苏木素染料脱去，再进行伊红染色，才能保证细胞核与细胞浆染色的分明。

4、返蓝作用：分化之后，苏木素在酸性条件下处于红色离子状态，呈红色；在碱性条件下处于蓝色离子状态，呈蓝色。组织切片经酸性乙醇分化后呈红色或粉红色，立即用水除去组织切片上的酸而中止分化，再用弱碱性水使苏木素染上的细胞核呈现蓝色，这个过程称为返蓝作用或蓝化作用，另外用自来水 (尤其是温水)浸洗也可使细胞核返蓝，但所需时间较长。

自备材料：

1、二甲苯或浸蜡脱蜡透明液、系列乙醇、自来水或蒸馏水

2、乙醚-乙醇混合固定液、4%多聚甲醛、中性树胶或环保封片胶

操作步骤(仅供参考)：

(一)石蜡切片染色

1、切片脱蜡至水

①二甲苯或浸蜡脱蜡透明液作用2次，每次5-10min。

②(可选)无水乙醇作用2次，每次3-5min。

③95%乙醇: 3-5min。

④90%乙醇: 3-5min。

⑤80%乙醇: 3-5min。

⑥自来水或蒸馏水 (亦可用30~40℃温水)冲洗: 1-3min。

2、染色

①苏木素染色液染色: 3-8min。

②自来水或蒸馏水冲洗: 5-10s。

③酸性乙醇分化: 2-5s。

④自来水冲洗: 20-30s。

⑤返蓝液或温水返蓝: 20-40s。

⑥自来水冲洗: 30-60s。

⑦伊红染色液 (水溶)染色: 20-60s。

⑧自来水冲洗: 30-60s。

3、脱水、透明、封固

①80%乙醇: 10-20s。

②90%乙醇: 10-20s。

③95%乙醇作用2次，每次1-2min。

④无水乙醇作用2次，每次2-3min。

⑤二甲苯或浸蜡脱蜡透明液透明3次，每次2-3min。

⑥中性树胶封片。

(二)冰冻切片染色

1、乙醚-乙醇混合固定液: 5-10s。

2、自来水冲洗: 2-5s。

3、苏木素染色液滴染1-5min (可加热至50℃)。

4、自来水冲洗: 2-5s。

5、酸性乙醇分化: 2-5s。

6、自来水冲洗: 2-5s。

7、返蓝液或温水返蓝: 2-5s。

8、自来水冲洗: 5-10s。

9、伊红染色液 (水溶)染色: 2-20s。

10、自来水冲洗: 5-10s。

11、80%乙醇: 1-2s。

12、95%乙醇: 1-2s。

13、无水乙醇: 2-5s。

14、苯酚二甲苯 (1:3): 2-5s。

15、二甲苯或浸蜡脱蜡透明液透明3次，每次2-5s。

16、中性树胶封片。

(三)细胞染色

1、4%多聚甲醛固定10-20min。

2、自来水冲洗2次，每次2min。

3、蒸馏水冲洗2次，每次2min。

4、染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤，作用时间应相应缩短。

染色结果：

细胞核呈蓝色；

细胞质、肌纤维、胶原纤维、甲状腺胶质等呈深浅不一的红色；

角蛋白、红细胞等呈明亮的橙红色。

注意事项：

1、切片脱蜡应尽量干净；温度低时，可在恒温箱60-70℃处理。

2、系列乙醇应经常更换新液。

3、酸性乙醇分化时间应根据切片厚薄、组织类别以及新旧而定，另外分化后自来水冲洗时间应该足够，以便彻底清洗酸。

4、乙醚-乙醇混合固定液是由乙醚和95%乙醇等量混合而得，再加入适量乙酸，密闭保存。

5、冷冻切片染色时间尽量要短。

6、返蓝液常使用0.2-1%氨水或Scott促蓝液或0.1-1%碳酸锂溶液代替。

7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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