中文名:2xTaq MasterMix
英文名:2xTaq MasterMix
纯度:用于聚丙烯酰胺凝胶电泳
货号:T665852
存储温度:-20°C储存,避免反复冻融
产品介绍:
| T665852 |
Component |
5 mL |
Storage |
| T665852A |
2×Taq MasterMix (for PAGE) |
5×1 mL |
-20℃. Avoid freeze/thaw cycle. |
| T665852B |
ddH₂O |
5×1 mL |
-20℃. Avoid freeze/thaw cycle. | |
注意:2×Taq MasterMix含有Taq DNA Polymerase, 3 mM MgCl2 和400 µM each dNTP。
产品简介:
2×Taq MasterMix是由Taq DNA Polymerase、Mg2+、dNTPs、PCR稳定剂和增强
剂组成的预混体系。预配好的PCR混合液使操作更加简单快捷,并可最大限度地减少
人为误差和污染。独创的MasterMix配方使扩增产物得率高,重复性强,稳定性好。本
品不含染料,PCR程序结束后可根据需要加入适量上样缓冲液后进行电泳操作。扩增
得到的PCR产物3′端附有一个“A”碱基,因此可直接用于T/A克隆。主要适用于PCR法扩
增DNA、DNA序列测定等实验,PCR扩增产物专用于聚丙烯酰胺凝电泳检测。
质量控制:
经检验无外源核酸酶活性;PCR方法检测无宿主残余DNA;能有效地扩增多种基
因组中的单拷贝基因。
使用方法:
以下举例为以人基因组DNA为模板,扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1. PCR反应体系
| 试剂 |
50 μl反应浓度 |
终浓度 |
| 2×Taq MasterMix(for PAGE) |
25 μl |
1× |
| Forward Primer,10 µM |
2 μl |
0.4 μM |
| Reverse Primer,10 µM |
2 μl |
0.4 μM |
| Template DNA |
<0.5 μg |
<0.5 μg/50 μl |
| ddH2O |
up to 50 μl |
/ | |
注意:引物浓度请以终浓度0.1-1.0 μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高 引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
2. PCR反应条件
| 步骤 |
温度 |
时间 |
/ |
| 预变性 |
94℃ |
2 min |
/ |
| 变性 |
94℃ |
30 s |
25-35 个循环 |
| 退火 |
55-65℃ |
30 s |
25-35 个循环 |
| 延伸 |
72℃ |
30 s |
25-35 个循环 |
| 终延伸 |
72℃ |
2 min |
/ | |
注意:
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降 低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定,本产品Taq DNA Polymerase的扩增效率为2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足; 如果循环次数太 多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
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