　　Cleanert PEP样品提取净化法

　　提取：取2g奶粉，加标，然后加12mL 80% 乙腈，涡旋混匀两分钟后，离心(90000r/min， 6min)取3mL上清液，加入9mL超纯水稀释，涡旋混匀后，待过Cleanert PEP柱净化。

　　净化步骤：

　　活化：以5mL乙腈，5mL水活化Cleanrt PEP;

　　上样：把上述稀释后的样品溶液过柱，流速控制以1mL/min为宜;

　　淋洗：待样品溶液完全通过小柱后，用5mL 5%乙腈淋洗小柱，然后真空抽干3min;

　　洗脱：以3-5mL乙腈洗脱目标，收集流出液;

　　浓缩：收集液以氮气浓度吹干(40℃水浴)，后以50% 甲醇水定容至1mL，混匀后过0.22μm微孔滤膜过，进LC-MS/MS分析。

　　Cleanert Silica样品提取净化法

　　提取：取2g奶粉，加标，然后加12mL 乙腈，涡旋混匀两分钟后，离心(90000r/min， 6min)取3mL上清液，待过Cleanert Silica柱净化。

　　净化步骤：

　　活化：以5mL乙腈活化Cleanrt Silica小柱;

　　上样：把上述提取液过柱，收集流出液;

　　淋洗：以5mL乙腈洗涤小柱，收集流出液;

　　浓缩：合并以上流出液液，以氮气浓度吹干(40℃水浴)，后以50% 甲醇水定容至1mL混匀后过0.22μm微孔滤膜，进LC-MS/MS分析。

　　色谱检测条件

　　孕激素(醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮)测定

　　液相色谱条件：色谱柱 (Bonshell C18 2.1×100mm,2.7μm);流动相：A：0.1%甲酸水，B: 甲醇，梯度条件(略);流速：0.3mL/min，柱温：40℃,进样量：10μL

　　参考质谱条件：电离源：电喷雾正离子模式;其他(略)

　　雌激素(雌二醇、雌酮)测定

　　液相色谱条件：色谱柱(Bonshell C18 2.1×100mm,2.7μm);流动相：A：水，B: 乙腈，梯度条件(略);流速：0.3mL/min，柱温：40℃, 进样量：10μL

　　参考质谱条件：电离源：电喷雾负离子模式;其他(略)

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