概述
乳铁蛋白(lactoferrin，LF)是乳汁中一种重要的非血红素铁 结合糖蛋白，中性粒细胞颗粒中具有杀菌活性的单体糖蛋白。 乳铁蛋白不仅参与铁的转运，而且具有抗菌、抗氧化、抗 癌、调节免疫系统等强大生物功能，被认为是一种新型抗菌、 抗癌药物和开发潜力的食品和饲料添加剂。
本试剂盒是应用 ELISA 技术研发的新一代牛乳铁蛋白检 测产品，操作时间需 25min，能减少操作误差和工作强度。
检测步骤
1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25℃）平 衡 1 小时或 37℃温箱平衡 30min 以上，注意每种液体试剂 使用前均须完全溶解摇匀。
2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放进原锡箔袋中 并且与提供的干燥剂一起重新密封，保存于 2～8℃。切勿 冷冻。
3、洗涤工作液在使用前也需回温。
4、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标 准品做 2 孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
5、加标准品/样本：加牛乳铁蛋白酶标物 50μL/孔到对应的微 孔中，再加入标准品或样本 50μL/孔。轻轻振荡混匀，用 盖板膜盖板后置 37℃避光环境中反应 15min。
6、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤液 250μL/ 孔，充分洗涤 4~5 次，每次间隔 10s，用吸水纸拍干（拍 干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。
7、显色：加入底物液 A 液 50μL/孔，再加入底物液 B 液 50μL/ 孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置 37℃避光环境中反 应 10min。
8、测定：加入终止液 50μL/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪 于 450nm 处（建议用双波长 450/630nm 检测，请在 5min 内读完数据），测定每孔 OD 值。
注意事项
1、试剂及样本没有回温到（20～25℃）会导致所有标准的 OD值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3、每加一种试剂前需将其摇匀。
4、反应终止液为 2M 硫酸，避免接触皮肤。
5、不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6、储存条件： 保存试剂盒于 2～8℃，不要冷冻，将不用的酶标板微孔板放进原锡箔袋中重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
7、试剂变质的迹象：发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。1080ppb标准的吸光度（450/630nm）值小于 0.5（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。
8、在加入底物液 A 液和底物液 B 液后，一般显色时间为10min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到 15min（或更长），但不得超过 20min。反之，则减短反应时间。
9、浓缩洗涤液及其他试剂组分出现结晶请加热（温度不超60℃）溶解后使用。
10、该试剂盒最佳反应温度为 37℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。
