维生素B12，又称钴胺素，是人体必须的维生素之一，但人体对其需求量相对较少，每天仅需3μg即可满足，维生素B12是唯一的一种需要肠道分泌物帮助才能被吸收的维生素，可以参与制造骨髓红细胞，防止恶行贫血，防止大脑神经受到破坏。但过多量的维生素B12可能导致神经损害、加重白血病或者引起过敏性疾病等问题。国家标准中规定的维生素B12含量在婴幼儿配方食品中为8.0μg/kg：儿童用乳粉为10~30μg/kg：孕产妇用乳粉为10~66μg/kg。

为保障广大群众食品安全，月旭科技最新推出Welchrom® 维生素B12亲和柱，广泛地应用于饮料、牛奶和奶粉，饮料等样品的提取，对提高食品的质量和安全性起到十分重要的作用。完全符合GB 5009.285-2022食品中维生素B12的测定等国家食品安全标准。

原理

Welchrom^® 维生素B12免疫亲和柱测定的基础是抗原抗体反应，维生素B12单克隆抗体连接在柱内凝胶上，样品中的维生素B12经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢的通过维生素B12免疫亲和层析柱，在免疫亲和柱内，维生素B12与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他物质。用甲醇洗脱维生素B12，然后注入到分析仪器中用于检测。

净化步骤

01

取10g试样于50mL离心管中，加入30mL乙酸钠缓冲液，用氢氧化钠溶液调pH至4.0，加入0.2g胃蛋白酶、0.05g淀粉酶和２mL氰化钾溶液，充分混合。将样品溶液放入水浴恒温振荡器，在37℃，振荡酶解30min。

02

酶解后转入100℃水浴中，保持30min，取出冷却至室温。将样品溶液转移至100mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。

03

移取上述溶液40mL至50mL离心管中，在10000r/min下离心10min，取上清液用玻璃纤维滤纸过滤后备用。

04

将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃注射器下。准确移取10.0mL样品提取液注入玻璃注射器。

05

将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约1滴/S的流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2~3mL空气通过柱体。

06

以10.0mL的PBS溶液和去离子水依次淋洗柱子1次，流速约为1-2滴/S，弃去全部流出液，并使2mL~3mL空气通过柱体。

07

准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱，流速为1滴/S，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。

色谱条件

色谱柱：月旭UItimate^® XB-C18（4.6×150mm，3μm）。

流动相：

柱温：40℃；

流动相配置